人參皂苷Rd對腦缺血后NMDA受體磷酸化的影響及機制研究.pdf

1、人參(PanaxginsengC.A.Meyer)作為一種傳統(tǒng)的中草藥,對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有協(xié)調大腦興奮與抑制、對抗氧化損傷、提高大腦機能、改善疲勞、增強大腦學習與記憶等功能。人參皂甙(Ginsenosides,GS)是人參的主要活性成分,雖然含量微少但卻是發(fā)揮藥理作用的主要成分。目前已從人參屬植物中分離提取出40多種GS單體。人參皂甙Rd(Ginsenoside-Rd,GSRd)是GS的重要組成成分之一。通過大量的臨床和基礎研究表明,

2、GSRd在神經(jīng)系統(tǒng),心血管系統(tǒng)和腎臟系統(tǒng)等中顯示出獨特的藥理作用。近年的研究顯示,GSRd具有明顯的神經(jīng)保護作用,如可保護神經(jīng)元抵抗過氧化物和糖氧剝奪(oxygen-glucosedeprivation,OGD)損傷,減少動物腦缺血梗死提及和促進神經(jīng)功能恢復等。我們最新研究發(fā)現(xiàn),GSRd能夠抑制高濃度谷氨酸(Glu)和N-甲基-D-天門冬氨酸受體(NMDAreceptor,NMDAR)介導的大量鈣內流[1],提示GSRd可能通過作用于N

3、MDAR發(fā)揮神經(jīng)保護作用,但具體作用機制尚未明確。結合文獻報道,GSRd及其類似單體物質可調節(jié)多種蛋白質的磷酸化并影響其功能[2-5],我們提出假說:GSRd可能通過影響NMDAR的磷酸化從而發(fā)揮其神經(jīng)保護作用。因此,本課題研究大腦中動脈栓塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)模型及OGD模型損傷后,GSRd對NMDA受體磷酸化的影響,以揭示GSRd腦保護的可能性機制。
　　實驗一GSRd對腦缺

4、血模型大鼠神經(jīng)功能評分及梗死體積的影響
　　目的:建立大鼠MCAO模型并驗證GSRd處理后對于大鼠神經(jīng)功能評分及腦梗死體積的影響。方法:建立大鼠MCAO模型,并在術前1小時及術后即刻給予不同濃度GSRd(10、50mg/kg),之后進行神經(jīng)功能評分,通過TTC染色觀察腦梗死體積變化,結果:GSRd能夠改善大鼠神經(jīng)功能評分,減小模型大鼠腦梗死體積;結論:GSRd處理能夠明顯改善大鼠腦梗的體積和癥狀
　　實驗二GSRd對MCAO

5、后NMDA受體NR2B亞基及其磷酸化的影響
　　目的:在大鼠MCAO模型的基礎上研究GSRd對梗死區(qū)NMDA受體NR2B亞基及其不同磷酸化位點的影響。方法:采用westernblot方法檢測腦缺血區(qū)不同時間點NR2B及其磷酸化的Ser1303、Tyr1472、Ser1480位點的表達情況。結果:(1)MCAO模型大鼠腦缺血損傷處的NR2B亞基、磷酸化Ser1303、Tyr1472、Ser1480表達水平較假手術組升高;(2)在MC

6、AO術前1小時及術后即刻給予不同濃度GSRd(10、50mg/kg),能夠有效降低大鼠腦缺血損傷側皮層的NR2B亞基、Ser1303、Tyr1472及Ser1480表達量,且呈劑量依賴性。結論:GSRd能夠有效降低MCAO模型中NR2B及磷酸化Ser1303、Tyr1472、Ser1480的水平,提示GSRd可能上述位點起到調節(jié)作用。
　　實驗三GSRd對糖氧剝奪損傷神經(jīng)元NR2B亞基及其磷酸化的影響
　　目的:在培養(yǎng)的離體

7、神經(jīng)元中進行OGD實驗,并研究GSRd處理后對于神經(jīng)元NMDA受體NR2B亞基及其不同磷酸化位點的影響。方法:采用離體培養(yǎng)神經(jīng)元OGD模型,并用Westernblot檢測NR2B亞基及其Ser1303、Tyr1472、Ser1480位點的磷酸化程度。結果:10μMGSRd預處理離體培養(yǎng)的神經(jīng)元,可下調OGD造成的NR2B亞基及磷酸化Ser1303、Tyr1472、Ser1480的水平升高。結論:GSRd能夠有效降低OGD模型中NR2B及