全細(xì)胞催化胞苷磷酸化合成三磷酸胞苷的研究.pdf

1、5’-胞苷三磷酸(CTP)是核酸合成的直接前體，在糖代謝中起著至關(guān)重要的作用，是生物體能直接吸收的高能量營養(yǎng)物質(zhì)。因為其具有多種重要的生理功能，對急性腦血管病、腦梗死、腦出血、突發(fā)性耳聾、帶狀皰疹等都有很好的治療效果，是一種極具開發(fā)潛能的藥物，市場前景廣闊。
　　 目前國內(nèi)外多用胞苷酸為底物合成三磷酸胞苷，底物成本較高，生產(chǎn)過程中有污染。本文以胞苷酸的前體為底物，利用啤酒酵母酶系催化胞苷磷酸化合成三磷酸胞苷，在小試中獲得了比較好

2、的產(chǎn)率。
　　 本文對釀酒酵母全細(xì)胞催化胞苷磷酸化合成三磷酸胞苷的研究進(jìn)行了探討，主要從以下三個方面進(jìn)行了研究：
　　 1、膜透性與CTP積累的研究。通過研究不同促滲透劑：新型促滲透劑15、甲苯、氣流干燥及吐溫100，與細(xì)胞合成CTP的關(guān)系，探討各種促滲透劑破壁效果以及對細(xì)胞酶系合成CTP活力的影響。
　　 2、金屬離子對CTP積累的影響。通過研究幾種主要的金屬離子(如Mg2+)對釀酒酵母合成CTP過程的影響，初

3、步探討了釀酒酵母合成CTP的反應(yīng)機(jī)理。
　　 3、對釀酒酵母磷酸化合成三磷酸胞苷的機(jī)理有初步認(rèn)識的基礎(chǔ)上，對以下10個因素進(jìn)行析因?qū)嶒炘O(shè)計：A胞苷，B葡萄糖，C酵母，D氯化鎂，E磷酸二氫鉀，F(xiàn)甲苯，G甘油，H乙醛，I pH，J溫度。影響最大的因素分別為：甲苯和磷酸二氫鉀。再通過響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化實驗，CTP實際轉(zhuǎn)化率達(dá)到90.1％，濃度33.25 g/L。
　　 本研究采用全細(xì)胞催化合成胞苷三磷酸，克服了發(fā)酵法代謝產(chǎn)物復(fù)雜、