人源基因核糖體DNA區(qū)靶向載體VEGF165的構(gòu)建及其在細(xì)胞中的定點(diǎn)表達(dá)研究.pdf

1、血管內(nèi)皮生長因子具有特異性促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘發(fā)新生血管生長的作用。利用血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因誘導(dǎo)治療性新生血管生成，從而治療缺血性心臟病和缺血性下肢疾病，是一種很有前景的方法。VEGF基因成功治療肢體血管閉塞癥和心臟缺血性疾病的臨床試驗(yàn)在國外已有較多的報(bào)道。 將外源基因VEGF導(dǎo)入到機(jī)體或細(xì)胞內(nèi)是基因治療的前提，目前，已有很多種技術(shù)和方法可將外源基因轉(zhuǎn)移到真核細(xì)胞中。病毒載體因其體內(nèi)、外轉(zhuǎn)染效率均較高，而成為在當(dāng)前V

2、EGF基因治療的基礎(chǔ)和臨床研究中應(yīng)用得最多的載體。然而，病毒載體的安全性仍然是一個(gè)不容忽視的問題。病毒載體的安全性問題主要存在于兩個(gè)方面，首先，由于它們易被機(jī)體識(shí)別為異源物質(zhì)而可能具有免疫原性(immunogenicity)，另外一個(gè)更大的威脅是它可能將外源基因或者自身基因片段隨機(jī)插入到宿主基因轉(zhuǎn)錄與/或調(diào)控區(qū)域，造成宿主細(xì)胞正常功能基因的失活與某些沉默基因的激活，從而可能引發(fā)腫瘤或其它疾病。因此，病毒載體并不是基因治療最理想的載體。醫(yī)

3、學(xué)遺傳學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的人源基因載體--核糖體基因(rDNA)區(qū)靶向表達(dá)載體pHrneo能攜帶外源基因以較高的效率(10<'-4>-10<'-5>)定點(diǎn)整合至人rDNA基因區(qū)。人每細(xì)胞有約600-800拷貝的rDNA基因，破壞一個(gè)拷貝對(duì)細(xì)胞維持正常的功能沒有影響，是安全的基因治療靶位點(diǎn)；而另一方面rDNA基因區(qū)編碼核糖體RNA(rRNA)，是轉(zhuǎn)錄異常活躍的染色體區(qū)域，外源基因整合于rDNA基因區(qū)可以有效的表達(dá)。因此，以人源基因載體p