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1、以商陸核糖體失活蛋白(PAP)的cDNA序列為依據(jù),設(shè)計(jì)并合成特異性引物,應(yīng)用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增出5'端含有BamHI,3'端含有KpnI限制性?xún)?nèi)切酶酶切位點(diǎn)的目的片段,且在序列的開(kāi)始和結(jié)尾分別加入起始密碼子ATG和終止密碼子TAA.將該目的片段定向克隆于載體pROKII中與CaMV35S啟動(dòng)子和Nos末端構(gòu)成植物表達(dá)載體pRPAP,通過(guò)菌落直接PCR法和酶切分析鑒定出陽(yáng)性重組子,用直接導(dǎo)入法將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105,以
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