絞股藍（Gynostemma pentaphyllum）核糖體失活蛋白轉(zhuǎn)基因水稻的研究.pdf

1、核糖體失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一種廣泛存在于植物中的可抑制蛋白質(zhì)生物合成的毒蛋白.大量研究表明RIP具有抗生育、抗腫瘤和抗病毒等諸多醫(yī)藥應用價值,有些在臨床使用上已取得了較好的效果;RIP還具有抗植物病毒、病原菌和害蟲等特性.因此,對RIP的研究具有重要的醫(yī)學意義和農(nóng)業(yè)應用價值.Gynostemmin是一種來源于絞股藍(Gynostemma pentaphyllum)的I型RIP.

2、將其基因與植物表達載體pCAMBIA1300-CP連接,構(gòu)建了植物表達載體pCA1300-RIP.通過與動員質(zhì)粒PRK2013和根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404進行三親交配,將其導入農(nóng)桿菌中.分別利用粳稻臺農(nóng)67的未成熟胚、經(jīng)分裂擴繁的幼胚和成熟胚作為受體材料,進行愈傷組織誘導.這些受體材料與重組農(nóng)桿菌進行共培養(yǎng)后,在潮霉素B(HygromycinB)的選擇壓力下進行篩選、分化,最后再生獲得

3、了轉(zhuǎn)基因植株.PCR及點雜交結(jié)果表明目的基因已整合到水稻基因組中.雜交表明擴增出來的條帶為轉(zhuǎn)入的目的序列而非水稻中的同源序列.RT-PCR及RT-PCR-Southem雜交結(jié)果表明目的基因已在植株體內(nèi)進行了轉(zhuǎn)錄.經(jīng)潮霉素B篩選,T0代植株種子的潮霉素抗性性狀發(fā)生分離,但其分離比例不符合孟德爾分離比例,推測在遺傳過程中外源基因在部分水稻中發(fā)生了丟失或影響了轉(zhuǎn)化植株的代謝使之賦予了潮霉素抗性.還對融合基因RIP-GST進行誘導表達,以表達產(chǎn)