法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑對膿毒癥小鼠免疫功能及預(yù)后影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 法尼基化蛋白含量和法尼基轉(zhuǎn)移酶活性與膿毒癥關(guān)系的研究
　　目的:探討蛋白法尼基化作用的激活與膿毒癥發(fā)病機(jī)制之間的聯(lián)系,并揭示法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑,FTI-277,對膿毒癥小鼠體內(nèi)的蛋白法尼基化作用。
　　方法:通過結(jié)腸結(jié)扎-穿孔(CLP)手術(shù)建造小鼠膿毒癥模型,以假(sham)手術(shù)建造對照模型。在 CLP手術(shù)或假手術(shù)后2小時腹腔注射法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑,FTI-277(25

2、mg/kg BW,IP),或注射 PBS為安慰劑。實(shí)驗(yàn)分為四組:Sham+PBS;Sham+FTI-277;CLP+PBS;CLP+FTI,每組各有4-6只小鼠。在 CLP手術(shù)或假手術(shù)后16小時,以頸椎脫臼法處死小鼠,取出小鼠的脾臟,采用免疫組化、ELISA的方法檢測小鼠脾臟內(nèi)法尼基化蛋白的表達(dá)及相對濃度;應(yīng)用放射性元素3H測定小鼠脾臟中法尼基轉(zhuǎn)移酶的活性。比較各組的差異并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:膿毒癥小鼠脾臟中的法尼基化蛋白

3、總量及法尼基轉(zhuǎn)移酶的活性明顯高于假手術(shù)組小鼠,FTI-277可抑制膿毒癥小鼠脾臟中法尼基轉(zhuǎn)移酶的活性并降低法尼基化蛋白含量。
　　結(jié)論:膿毒癥可導(dǎo)致小鼠脾臟中法尼基化蛋白的含量和法尼基轉(zhuǎn)移酶的活性增高,法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑改善該變化。
　　第二部分 法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(FTI-277)與巨噬細(xì)胞吞噬作用關(guān)系的研究
　　目的:探討法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑,FTI-277,對膿毒癥小鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞吞噬活性的影響。
　　方法:

4、通過結(jié)腸結(jié)扎-穿孔(CLP)手術(shù)建造小鼠膿毒癥模型,以假(sham)手術(shù)建造對照模型。在 CLP手術(shù)或假手術(shù)后2小時腹腔注射法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑,FTI-277(25 mg/kg BW,IP),或注射 PBS為安慰劑。實(shí)驗(yàn)分為四組:Sham+PBS;Sham+FTI-277;CLP+PBS;CLP+FTI,每組各有4-6只小鼠。在 CLP手術(shù)或假手術(shù)后16小時,以頸椎脫臼法處死小鼠,取得小鼠外周血和腹腔灌洗液。采用細(xì)菌培養(yǎng)法檢測小鼠外周血

5、和腹腔灌洗液中細(xì)菌的含量。使用流式細(xì)胞儀分析小鼠腹腔灌洗液中巨噬細(xì)胞的總數(shù)及吞噬活性。比較各組的差異并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:膿毒癥小鼠外周血及腹腔灌洗液中的細(xì)菌含量顯著高于假手術(shù)組小鼠,FTI-277的處理可有效減少細(xì)菌的總量。CLP手術(shù)本身極大的增多了小鼠腹腔內(nèi)巨噬細(xì)胞的總數(shù),減弱了巨噬細(xì)胞的吞噬活性。FTI-277的處理增強(qiáng)了膿毒癥小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬活性,沒有改變巨噬細(xì)胞的總數(shù)。
　　結(jié)論:結(jié)果顯示經(jīng) FTI-27

6、7治療后的膿毒癥小鼠血液和腹腔內(nèi)的細(xì)菌含量明顯減少,巨噬細(xì)胞活性增強(qiáng),表明法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑對提高膿毒癥小鼠清除細(xì)菌的能力及增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬活性有重要的作用。
　　第三部分法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(FTI-277)與膿毒癥小鼠免疫反應(yīng)關(guān)系的研究
　　目的:探討膿毒癥引發(fā)的免疫抑制,以及法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑對膿毒癥小鼠體內(nèi)免疫抑制的作用。
　　方法:通過結(jié)腸結(jié)扎-穿孔(CLP)手術(shù)建造小鼠膿毒癥模型,以假(sham)手術(shù)建造對照

7、模型。在CLP手術(shù)或假手術(shù)后2小時腹腔注射法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑,FTI-277(25 mg/kg BW,IP),或注射PBS為安慰劑。實(shí)驗(yàn)分為四組:Sham+PBS;Sham+FTI-277;CLP+PBS;CLP+FTI,每組各有4-6只小鼠。在CLP手術(shù)或假手術(shù)后16小時,以頸椎脫臼法處死小鼠,取出小鼠脾臟,游離脾細(xì)胞。應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析小鼠脾臟內(nèi)CD4+Foxp3+T細(xì)胞和PD-L1/PD-1的表達(dá)。體外培養(yǎng)游離的脾細(xì)胞,用抗CD3

8、+CD28抗體刺激后,采用ELISA法測定上清液中IFN-γ與IL-4的濃度,使用熒光試劑刃天青檢測脾臟T細(xì)胞的增殖能力。比較各組的差異并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:膿毒癥小鼠脾臟內(nèi) CD4+Foxp3+T細(xì)胞比例升高,IFN-γ的分泌被抑制,脾細(xì)胞對抗 CD3+CD28抗體刺激引起的細(xì)胞增生減弱,PD-L1和PD-1的表達(dá)增強(qiáng)。FTI-277可降低 CD4+Foxp3+T細(xì)胞的比例,改善 IFN-γ的分泌,增強(qiáng)脾細(xì)胞增生,減弱

9、PD-L1和PD-1的表達(dá)。
　　結(jié)論:結(jié)果顯示膿毒癥可導(dǎo)致小鼠脾臟 T細(xì)胞功能失常,引起脾細(xì)胞免疫抑制,FTI-277有效的改善了脾細(xì)胞免疫抑制反應(yīng)。
　　第四部分 法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(FTI-277)對膿毒癥小鼠生存率及相關(guān)因素作用的研究
　　目的:探討法尼基轉(zhuǎn)移酶對小鼠預(yù)后的影響。
　　方法:通過結(jié)腸結(jié)扎-穿孔(CLP)手術(shù)建造小鼠膿毒癥模型,以假(sham)手術(shù)建造對照模型。在CLP手術(shù)或假手術(shù)后2小時腹

10、腔注射法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑,FTI-277(25 mg/kg BW,IP),或注射PBS為安慰劑。實(shí)驗(yàn)分為四組:Sham+PBS;Sham+FTI-277;CLP+PBS;CLP+FTI,每組各有4-6只小鼠。CLP手術(shù)后觀察7天,記錄小鼠生存率。另在CLP手術(shù)或假手術(shù)后16小時,以頸椎脫臼法處死小鼠,抽取外周血,采用ELISA法測定血清中HMGB1的濃度;取出小鼠脾臟和胸腺,采用免疫組化檢測細(xì)胞凋亡;使用心動超聲儀和左心室功能檢測評估小