黃芪甲苷和環(huán)黃芪醇生產(chǎn)工藝的研究.pdf

1、黃芪藥材所含黃芪皂苷種類非常多，能夠從黃芪根中分離鑒定出來就的就有數(shù)十種。黃芪甲苷(AstragalosideⅣ，AST)是主要有效成分之一。它具有加強(qiáng)免疫力，保護(hù)肝臟，清除體內(nèi)自由基等作用，具有很高的藥用價值。環(huán)黃芪醇（Cycloastragenol，CA）是從豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根中直接提取分離或由黃芪甲苷(AstragalosideⅣ)的水解得到，被認(rèn)為是抗衰老的明星分子。本實驗從黃芪藥材出發(fā)，研究黃芪甲苷的生產(chǎn)工藝，

2、并對黃芪甲苷的水解產(chǎn)物環(huán)黃芪醇的生產(chǎn)方法做出探究。本課題的目的是建立一種環(huán)保經(jīng)濟(jì)的黃芪甲苷生產(chǎn)方法，為實現(xiàn)黃芪甲苷的工業(yè)化生產(chǎn)打下基礎(chǔ);系統(tǒng)研究環(huán)黃芪醇的生產(chǎn)方法，分析黃芪甲苷到環(huán)黃芪醇的轉(zhuǎn)化過程，找出最佳生產(chǎn)方法。
　　首先，比較高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)、高效液相色譜-示差折光檢測器(HPLC-RI)和硅膠薄層色譜法(TLC)的優(yōu)劣，并優(yōu)化檢測條件建立黃芪甲苷及環(huán)黃芪醇的檢測方法。其次，建立黃芪甲苷的生產(chǎn)

3、工藝:優(yōu)化傳統(tǒng)的溶劑提取法，篩選出黃芪甲苷含量高的原料。然后利用綠色木霉對其進(jìn)行發(fā)酵，優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基為黃芪粉20g·L-1，葡萄糖10g·L-1，酵母粉5g·L-1，(NH4)2SO42.8g·L-1，KH2PO44g·L-1，MgSO4·7H2O1 g·L-1，CaCl21g·L-1，初始pH值為5.0，優(yōu)化發(fā)酵條件——接種種子液體積比例為1％，溫度28℃，轉(zhuǎn)速120 r·min-1，周期6天。篩選出HPD-100大孔吸附樹脂，探究最

4、佳分離條件，得到產(chǎn)品的純度為11％左右，該工藝的產(chǎn)率為95％。利用硅膠柱層析純化，產(chǎn)品的純度為86.5％，本步驟的產(chǎn)率為70.8％。利用甲醇重結(jié)晶可以得到純度98％以上的產(chǎn)品，經(jīng)過質(zhì)譜鑒定可以確定分離產(chǎn)品為黃芪甲苷。
　　最后，探究環(huán)黃芪醇的生產(chǎn)方法:硫酸水解的方法，黃芪甲苷粗提物加入5％的硫酸溶液，料液比1∶25，在130℃，水解6h，可得到轉(zhuǎn)化率67％的產(chǎn)品。商品酶酶解的方法，所購買的商品酶中白銀賽諾生化有限公司產(chǎn)的β-葡萄糖

5、苷酶效果最好，酶解條件為最適時間為48h，酶活濃度為500 IU·ml-1，底物濃度為50 mg·ml-1，但是得到環(huán)黃芪醇的轉(zhuǎn)化率僅在10％左右，探究發(fā)現(xiàn)抑制因素可能不僅僅是葡萄糖的累積。綠色木霉和炭黑曲霉混菌發(fā)酵黃芪藥材產(chǎn)環(huán)黃芪醇，培養(yǎng)基為黃芪粉20g·L-1，可溶性淀粉10g·L-1，酵母粉5g·L-1，(NH4)2SO42.8g·L-1，KH2PO44g·L-1，MgSO4·7H2O1g·L-1，CaCl21g·L-1，吐溫-8