AMPARs的膜穩(wěn)定性在大鼠條件性恐懼記憶中的作用及機(jī)制.pdf

1、第一部分 AMPARs的膜穩(wěn)定性對(duì)大鼠衰老相關(guān)情感記憶障礙的作用及機(jī)制
　　目的：確定在衰老大鼠上是否存在情感相關(guān)記憶受損的現(xiàn)象。在這個(gè)過程中是否存在α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸受體（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid receptor，AMPAR）膜表達(dá)水平的改變。嘗試干預(yù)AMPARs的膜表達(dá)能否逆轉(zhuǎn)衰老大鼠情感記憶障礙。
　　方法：采

2、用環(huán)境依賴的條件性恐懼方式建立衰老大鼠海馬相關(guān)情感記憶研究模型；海馬Cornu ammon1（CA1）區(qū)微透析-高效液相色譜法檢測(cè)去甲腎上腺素（norepinephrine，NE）含量；BS3法以及western blot檢測(cè)海馬區(qū)AMPARs以及相關(guān)蛋白表達(dá)水平；電生理記錄離體海馬腦片長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)（long-term potentiation，LTP）；腺病毒過表達(dá)干擾谷氨酸受體-AMPAR亞型1（glutamate receptor-

3、AMPAR，GluA1）磷酸化和膜表達(dá)；整體和局部腦區(qū)給藥檢測(cè)行為學(xué)指標(biāo)。
　　結(jié)果：（1）衰老大鼠情感相關(guān)記憶能力受損（成年大鼠：81.74+4.51％，衰老大鼠：46.84+5.61%；F(1,15)=23.89，P<0.001），訓(xùn)練后海馬CA1區(qū)去甲腎上腺素增加減少（成年大鼠：229.17+12.22%，衰老大鼠：160.45+19.79%；F=9.240，P=0.009，20 min），（成年大鼠：229.17+12.2

4、2%，衰老大鼠：160.45+19.79%；F=9.240，P=0.009，40 min)、AMPARs的膜表達(dá)增加水平受損（成年大鼠：1.75+0.11，衰老大鼠：1.27+0.07；F=27.60，P<0.001），海馬Schaffer collateral（SC）-CA1區(qū)LTP受損（成年大鼠：140.94+2.88%，衰老大鼠：106.63+4.49%；F(1,20)=43.59，P<0.001）；（2）去甲腎上腺逆轉(zhuǎn)衰老相關(guān)L

5、TP受損的現(xiàn)象（衰老大鼠：106.63+4.49%，衰老大鼠+10μM NE：143.76+4.03%，衰老大鼠+20μMNE：177.53+9.91%；F(2,27)=30.25，P<0.001），但是不影響衰老大鼠LTP誘發(fā)的閾值（F(1,15)=3.49，NS）；（3）去甲腎上腺素通過β-腎上腺素能受體-PKA/CaMKII-GluA1-845/831途徑改善衰老大鼠AMPARs的膜表達(dá)（F(5,30)=3.89，P=0.008）

6、；（4）過表達(dá)GluA1-C-tail后阻斷去甲腎上腺素對(duì)衰老大鼠LTP（F(1,15)=0.35，NS）、GluA1膜表達(dá)的作用（F(5,42)=11.79，P<0.001）；（5）降低成年大鼠去甲腎上腺素水平能模擬衰老大鼠 LTP受損的現(xiàn)象。給予利血平耗竭成年大鼠體內(nèi)單胺能神經(jīng)遞質(zhì)可損傷LTP（溶劑：151.35+5.50%，利血平：129.26+4.66%，利血平+N E：159.98+6.16%；F(2,27)=9.154，P=

7、0.001），抑制藍(lán)斑核活性降低成年大鼠去甲腎上腺素的合成也損傷LTP（生理鹽水：150.30+2.80%，利多卡因：129.56+5.27%，利多卡因+NE：143.45+3.56%；F(2,26)=7.76，P=0.002）；（6）海馬區(qū)給予去甲腎上腺或地昔帕明（F(4,33)=8.24，P<0.001）逆轉(zhuǎn)衰老大鼠情感相關(guān)記憶障礙，過表達(dá)GluA1-C-tail阻斷以上作用；整體給予地昔帕明（F(3,28)=7.85，P=0.00

8、1）逆轉(zhuǎn)衰老大鼠情感記憶障礙。
　　結(jié)論：通過干預(yù)AMPARs的膜穩(wěn)定性能逆轉(zhuǎn)衰老大鼠情感相關(guān)記憶受損的現(xiàn)象。
　　第二部分 AMP ARs的膜穩(wěn)定性對(duì)大鼠恐懼記憶保留水平的作用和機(jī)制
　　目的：確定 AMPARs的膜表達(dá)在條件性恐懼記憶再喚醒過程中的改變，普萘洛爾能否通過干預(yù)再喚醒過程中AMPARs的膜表達(dá)水平降低恐懼記憶保留的水平。
　　方法：采用條件性恐懼方式建立恐懼記憶模型；杏仁核區(qū)微透析-高效液相色譜法

9、檢測(cè)去甲腎上腺素含量；BS3法以及Western blot檢測(cè)杏仁核AMPARs以及相關(guān)蛋白表達(dá)水平；電生理記錄離體杏仁核腦片長(zhǎng)時(shí)程抑制（long-term depression，LTD）、興奮性突觸后電流（excitatory postsynaptic current，EPSC）；腺病毒過表達(dá)干擾GluA1的磷酸化、膜表達(dá)和功能；整體和局部腦區(qū)給藥檢測(cè)行為學(xué)指標(biāo)。
　　結(jié)果：（1）普萘洛爾通過依賴于再喚醒的方式減弱大鼠恐懼記憶能

10、力（F(2,21)=10.90，P=0.001）、逆轉(zhuǎn)再喚醒導(dǎo)致的丘腦-杏仁核區(qū) LTD的受損（F(3,39)=42.20，P<0.001）和GluA1膜表達(dá)的增加（F(4,25)=5.08，P=0.004）；（2）恐懼記憶再喚醒導(dǎo)致杏仁核區(qū)去甲腎上腺素水平增加（喚醒前115.43+7.99%：?jiǎn)拘押螅?99.39+31.83%；F(1,14)=6.54，P=0.04）；去甲腎上腺素增加杏仁核區(qū)GluA1膜表達(dá)（F(2,21)=6.45

11、4，P=0.007），尤其是突觸外GluA1的膜表達(dá)（F(1,14)=13.67，P=0.002）、損傷丘腦-杏仁核區(qū) LTD（F(4,48)=49.1，P<0.001）；（3）普萘洛爾或過表達(dá)GluA1-C-tail均能阻斷去甲腎上腺素對(duì)杏仁核區(qū)GluA1膜表達(dá)的增強(qiáng)功能（F(5,36)=5.77，P=0.001，普萘洛爾；F(3,20)=6.48，P=0.003，GluA1-C-tail C-tail），改善LTD的損傷（F(3,3

12、3)=27.33，P<0.001，普萘洛爾；F(1,16)=0.43，P=0.521，GluA1-C-tail）；（4）普萘洛爾通過作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的途徑阻斷去甲腎上腺素對(duì)GluA1膜表達(dá)（F(6,35)=4.78，P=0.001）和LTD（P=0.53）的作用；（5）杏仁核區(qū)給予普萘洛爾（F(1,14)=78.10，P<0.001）或過表達(dá) GluA1-C-tail（F(1,15)=95.72，P<0.001）均能通過依賴于再喚醒的