14-3-3β基因與卡波氏肉瘤相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：本研究旨在利用分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)方法初步探討14-3-3β，基因在卡波氏肉瘤(Kaposi’s Sarcoma，KS)發(fā)生發(fā)展中的作用以及在KS發(fā)病中的可能機(jī)制。 方法：收集21例新疆KS患者腫瘤組織、瘤旁正常皮膚組織樣本以及12例非KS患者的正常皮膚組織樣本作為對(duì)照，分別采用Real-time PCR利免疫組化技術(shù)，從mRNA和蛋白水平檢測(cè)樣本中14-3-3 β表達(dá)情況；利用基因重組技術(shù)構(gòu)建14-3-3 β真核表達(dá)載

2、體，通過(guò)脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV-304)與BC-3細(xì)胞，用western-blot鑒定轉(zhuǎn)染48小時(shí)后含外源性14-3-3 β的細(xì)胞株，并觀察細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，用 Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖率等生物學(xué)特征變化；應(yīng)用免疫組織化學(xué)Envision二步法和原位細(xì)胞凋亡標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)對(duì)KS患者腫瘤組織及正常皮膚組織進(jìn)行細(xì)胞增殖指數(shù)(proliferation index，P

3、I)及細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptotic index，AI)的檢測(cè)。 結(jié)果：(1)7例KS患者腫瘤組織中14-3-3 β基岡的mRNA表達(dá)值為3.60±2.62×10<'-1>，最低值為0.78×10<'-1>，最高值為6.83×10<'-1>； 7例KS患者止常皮膚組織中的mRNA表達(dá)值為0.95±0.50×10<'-1>，最低值為0.22×10<'-1>，最高值為1.82×10<'-1>。經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，KS腫瘤組織中14-3-

4、3 β的mRNA表達(dá)高于自身對(duì)照的正常皮膚組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.554，P<0.05)。(2)14-3-3 β蛋白在KS組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于在正常皮膚組織中的表達(dá)(x<'2>=18.958，P<0.01)，其陽(yáng)性反應(yīng)程度在兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.136，P<0.01)。(3)成功構(gòu)建了14-3-3 β基因的真核表達(dá)載體，將構(gòu)建的重組體分別轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304利BC-3細(xì)胞48h后，均有不同程度外

5、源性14-3-3 β蛋白的表達(dá)，增殖率檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染10μg/μl，20μg/μl，40μg/μl，80μg/μl重組體后，ECV-304細(xì)胞增殖率分別為19.22±19.90％、36.44±17.84％、41.51+32.52％、46.36±19.89： BC-3細(xì)胞增殖率分別為42.58±24.27％、47.26±26.99％、51.35±13.63％、81.83±20.37％，與陰性對(duì)照組及未轉(zhuǎn)染組比較，均有顯著性差異(p<0.

6、05)。(4)KS組織中PI和AI均明顯高于正常皮膚組織(t=6.914、3.183，P<0.01);KS組織中t4-3-3 β蛋白與PI呈正相關(guān)(r=0.671，P<0.01)，與AI呈正相關(guān)(r=0.649，P<0.05)。 結(jié)論：(1)14-3-3 β基因在KS組織中mRNA和蛋白表達(dá)水平均增高：(2)14-3-3 β基因過(guò)表達(dá)與KS腫瘤細(xì)胞的惡性增殖有關(guān)；(3)14-3-3 β基因在HHV-8感染的細(xì)胞中對(duì)腫瘤細(xì)胞的促增