HO—1基因與卡波氏肉瘤相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討血紅素加氧酶1(HO-1)基因抗凋亡通路在卡波氏肉瘤(KS)發(fā)生發(fā)展中的作用以及可能機制。 方法：收集21例新疆KS患者腫瘤組織、瘤旁正常皮膚組織以及14例非KS患者的正常皮膚組織樣本作為對照,分別采用Real-time PCR和免疫組化技術(shù),從mRNA和蛋白水平檢測樣本中HO-1表達情況。從組織水平檢測HO-1的抗凋亡通路：免疫組化Envision方法檢測KS患者腫瘤組織及正常皮膚組織中p38和TNFa表達

2、；原位細(xì)胞凋亡標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測KS患者腫瘤組織及正常皮膚組織中凋亡指數(shù)(AI)。從細(xì)胞水平檢測HO-1的抗凋亡通路：培養(yǎng)BCBL1細(xì)胞,TNFa誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,以及HO-1激活劑Hemin、HO-1抑制Znpp和p38抑制劑SB203580分別刺激細(xì)胞,誘導(dǎo)和抑制細(xì)胞內(nèi)HO-1表達,抑制p38表達。Western Blot方法檢測HO-1、p38和TNFa蛋白水平表達,同時流式細(xì)胞儀檢測凋亡率。 結(jié)果： (1)用

3、雙標(biāo)準(zhǔn)曲線相對定量法分析實時定量PCR結(jié)果,KS腫瘤組織中HO-1mRNA相對表達量為14.14±11.64,瘤旁正常皮膚組織為5.5±8.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。對照的正常皮膚組織為1.82±2.62,腫瘤組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 (2)免疫組化結(jié)果:HO-1蛋白在KS組織中的陽性表達率顯著高于在正常皮膚組織中的表達,其陽性反應(yīng)程度在兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 (3)p38蛋白在KS組織中的陽性表達率顯著高于在

4、正常皮膚組織中的表達,其陽性反應(yīng)程度在兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而TNFa蛋白表達在KS實驗組中7例陽性,7例表達陰性。表達陽性的多數(shù)定位在梭型細(xì)胞或漿細(xì)胞,但實驗組與對照組間無顯著性差異。KS組織中AI明顯高于正常皮膚組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 (4)流式細(xì)胞儀檢測凋亡率和Western Blot結(jié)果顯示:HO-1、p38在BCBL1細(xì)胞中高表達,TNFa在BCBL1細(xì)胞中低表達,HO-1可抑制TNFa引起的凋亡。Hemin誘導(dǎo)

5、HO-1高表達后細(xì)胞凋亡率為4.37％,Znpp抑制HO-1表達后細(xì)胞凋亡率為31.81％,SB203580抑制p38表達后細(xì)胞凋亡率為19.71％。表明Hemin處理后HO-1表達上調(diào),顯著抗細(xì)胞凋亡,而Znpp抑制HO-1表達后,凋亡率大量增加,SB203580抑制p38表達后,凋亡率也顯著增加。細(xì)胞凋亡率與HO-1表達量呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論： (1)HO-1基因在KS組織中mRNA和蛋白水平表達均增高； (2)