TGF-β1通過p38 MAPK信號(hào)通路促進(jìn)三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231遷移及VEGF-D的表達(dá).pdf

1、背景及目的:淋巴道轉(zhuǎn)移早是三陰性乳腺癌預(yù)后極差的一個(gè)重要原因,其早期發(fā)生淋巴道轉(zhuǎn)移高達(dá)50％以上。研究證實(shí),癌細(xì)胞向淋巴管的侵襲轉(zhuǎn)移除了與癌細(xì)胞的侵襲遷移能力相關(guān)外,還涉及到癌組織中淋巴管的新生。目前大多數(shù)研究認(rèn)為VEGF-D是特異性的淋巴管生成因子,它與VEGFR-3結(jié)合可導(dǎo)致VEGFR-3胞內(nèi)區(qū)酪氨酸磷酸化,觸發(fā)絲裂原蛋白激酶(MAPK)級(jí)聯(lián)反應(yīng),啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄,引起淋巴內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖,從而導(dǎo)致淋巴管的生成。近年來眾多研究證實(shí)TGF-

2、β1與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。但關(guān)于TGF-β1對(duì)三陰性乳腺癌淋巴道轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制研究的較少。目前又有多項(xiàng)體外研究證實(shí),p38 MAPK信號(hào)通路在癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。那么,它們之間究竟有沒有關(guān)系,是什么樣的關(guān)系?需要不斷地研究予以解答。
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用人三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231,在細(xì)胞水平探究TGF-β1能否增強(qiáng)MDA-MB-231的遷移能力,以及能否上調(diào)VEGF-D的表達(dá)從而促進(jìn)三

3、陰性乳腺癌淋巴道轉(zhuǎn)移。并在此基礎(chǔ)上,探討p3g MAPK信號(hào)通路是否參與其中。
　　 方法:MTT比色法檢測TGF-β1對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231增殖的影響。并探求TGF-β1調(diào)控其增殖的濃度效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)。劃痕實(shí)驗(yàn)檢測TGF-β1對(duì)MDA-MB-231遷移能力的影響,同時(shí)探討該過程與p38 MAPK信號(hào)通路的相關(guān)性。利用Western Blot和ELISA檢測TGF-β1對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞VEGF-D表達(dá)

4、的影響,并探究該過程是否與p38 MAPK信號(hào)通路相關(guān)。
　　 結(jié)果:低濃度TGF-β1(5.0ng/ml)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用。隨著劑量的增加和時(shí)間的延長,這種抑制作用變得不明顯。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示不同濃度TGF-β1作用MDA-MB-231細(xì)胞24h,細(xì)胞的遷移能力均明顯增強(qiáng);而預(yù)先應(yīng)用p38特異性抑制劑阻斷p38 MAPK信號(hào)通路后,發(fā)現(xiàn)TGF-β1促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞遷移的作用被明顯抑制。W

5、estern Blot和ELISA共同證實(shí)TGF-β1能夠促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞分泌VEGF-D;而預(yù)先應(yīng)用p38特異性抑制劑阻斷p38 MAPK信號(hào)通路,TGF-β1上調(diào)VEGF-D的作用受到明顯抑制。
　　 結(jié)論:
　　 1.TGF-β1對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖有一定的抑制作用。隨著劑量的增加和時(shí)間的延長,這種抑制作用逐漸消失。
　　 2.TGF-β1能夠促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞