Rho GTP酶在白血病細(xì)胞行為異常及與骨髓微環(huán)境相互作用異常中的意義.pdf

1、造血微環(huán)境是維持造血干細(xì)胞自我更新潛能、制約細(xì)胞過度增殖、確保子細(xì)胞有序分化的重要場所，骨髓微環(huán)境中造血干細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞的粘附及細(xì)胞遷移的有序狀態(tài)決定了造血干細(xì)胞的正常發(fā)育，有序狀態(tài)的破壞使造血干細(xì)胞逃離微環(huán)境的制約，可能導(dǎo)致造血干細(xì)胞自我更新失衡及白血病細(xì)胞惡性行為的獲得。
　　 Rho GTP酶是Ras超家族中小分子量G蛋白的成員之一，是一類分子量為20～30kD的GTP結(jié)合蛋白。Rho GTP酶家族是連接細(xì)胞外信號與肌動蛋

2、白細(xì)胞骨架系統(tǒng)的關(guān)鍵因子，是調(diào)控細(xì)胞極性化和細(xì)胞骨架重塑的關(guān)鍵蛋白，調(diào)控著肌動蛋白細(xì)胞骨架的動力學(xué)。細(xì)胞黏附喪失及啟動遷移的細(xì)胞內(nèi)在分子機(jī)制是Rho GTP酶的上調(diào)和活化。為確定骨髓微環(huán)境與造血細(xì)胞相互作用異常在白血病中的作用，我們以Rho GTP酶家族成員為研究對象，通過確定Rho GTP酶家族成員RhoA、Racl及CDC42在白血病細(xì)胞的表達(dá)異常，及Racl的高表達(dá)及活化在白血病細(xì)胞行為異常及在白血病細(xì)胞與骨髓微環(huán)境相互作用異常中

3、的意義，以闡明其在白血病發(fā)生中的作用，具體研究內(nèi)容如下：
　　 1.白血病患者RhoA、Racl和CDC42的蛋白表達(dá)：應(yīng)用Western-blot方法檢測88例急性白血病患者和22例正常骨髓移植供者骨髓單個(gè)核細(xì)胞的Racl相對表達(dá)水平，同時(shí)檢測54例急性白血病RhoA和CDC42的相對表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)與正常人相比，白血病患者RhoA、Racl和CDC42表達(dá)升高，非配對t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。

4、r>　　 2.Racl的高表達(dá)在白血病細(xì)胞行為中的作用：通過小RNA方法干擾白血病細(xì)胞系KGl-a和HL-60細(xì)胞內(nèi)Racl的表達(dá)，測定干擾后細(xì)胞的遷移及增殖能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞的遷移、增殖及集落形成能力均降低。
　　 3.Racl-GTP酶的活化在白血病細(xì)胞中的作用：采用Rac的特異性抑制劑處理白血病細(xì)胞，測定細(xì)胞的遷移及增殖能力，結(jié)果顯示，細(xì)胞的遷移和增殖能力均顯著降低，從而證實(shí)白血病細(xì)胞中Racl-GTP酶的活化與白血病

5、細(xì)胞遷移活躍及增殖旺盛有關(guān)。進(jìn)一步我們構(gòu)建表達(dá)組成性活化型Racl的慢病毒載體和表達(dá)負(fù)顯性抑制型Racl的慢病毒載體，將慢病毒感染KGl-a細(xì)胞。GST-pull down實(shí)驗(yàn)確定了病毒感染的細(xì)胞內(nèi)Racl-GTP酶的水平活化后，對感染細(xì)胞的生物學(xué)功能進(jìn)行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)感染組成性活化型Racl慢病毒載體的KG1-a細(xì)胞的遷移能力增強(qiáng)，對VP16的耐藥性增加，在骨髓基質(zhì)細(xì)胞上粘附能力明顯降低、遷移活躍；感染負(fù)顯性抑制型Racl慢病毒載體