磷脂酰膽堿的分離提取與松蘿酸脂質體的研究.pdf

1、本論文分為兩部分開展實驗。第一部分以蛋黃粗磷脂作為原料分離提純得到E80(磷脂酰膽堿PC的含量在80﹪以上)以及深加工產(chǎn)品E98(磷脂酰膽堿PC的含量在98﹪以上)，并對兩種產(chǎn)品的質量做出評價。E80的質量評價包括酸值、碘值、皂化值、有關物質、水分等；E98的質量評價除包括上述E80各檢測項之外，用<'1>H-NMR和<'13>C-NMR圖譜對PC的結構進行了確證。并用HPLC分析了兩種產(chǎn)品中各磷脂組分的種類和含量。第二部分是使用第一部

2、分分離提純得到的E98，與膽固醇篩選合適的配方包埋藥物松蘿酸制備松蘿酸脂質體。對松蘿酸脂質體進行質量評價，包括粒徑測量、藥脂比大小、載藥量高低、包封率高低等。并對貯藏了一個月的脂質體進行了穩(wěn)定性研究。 采用有機溶劑沉淀法對蛋黃粗磷脂進行處理。依次用丙酮和無水乙醇溶解浸泡該磷脂粗品，過濾除去不溶性雜質；用重蒸丙酮沉淀得到成品粗品；用活性炭進行脫色處理；95﹪乙醇進行精制；重蒸丙酮二次沉淀后在凍干設備上凍干制得成品。按2005年版《

3、中華人民共和國藥典》有關規(guī)定對成品進行質量評價。經(jīng)分析采用有機溶劑沉淀法制備的成品各質量參數(shù)均符合寶雞力邦生物工程有限公司的企業(yè)內部自控標準。產(chǎn)品性能達到了德國Lipoid公司生產(chǎn)的E80產(chǎn)品的水平，完全可以替代該產(chǎn)品使用。 將制得的E80作為原料，采用柱層析色譜法深加工得到高純磷脂產(chǎn)品E98。上柱的洗脫液采用氯仿和甲醇的混合溶媒。TLC進行實時檢測，檢測結果作為更換洗脫液中氯仿和甲醇比例的判斷依據(jù)。將沈脫液按所含物質種類的不同

4、分批收集濃縮后脫色，在重蒸丙酮中沉淀、凍干設備上凍干制得成品E98。按E80的相關步驟對深加工產(chǎn)品進行質量評價。結果得到的成品純度在98﹪以上。用核磁共振儀對E98進行<'1>H-NMR和<'13>C-NMR的分析確定了其結構。 將E98和膽固醇作為基礎原料，篩選合適的配方工藝制備松蘿酸脂質體，并評價了其質量。建立了松蘿酸脂質體的HPLC色譜條件和包封率的測定方法。HPLC色譜條件是用C<,18>反相色譜柱，(250mm×4.6

5、mm，5μ)，流動相組成為甲醇：PBS(pH為5.0左右)=70：30(體積比)，流速為lml/min，紫外檢測波長為284nm。包封率的測定方法是用自制的Sephadex G-25葡聚糖微型凝膠色譜柱分離脂質體和游離藥物，蒸餾水作為洗脫劑，用HPLC檢測脂質體中藥物和游離藥物的含量，計算出松蘿酸脂質體的包封率。結果表明，E98和膽固醇以70∶30(mol∶mol)為配方制備的脂質體，可以包封松蘿酸藥量達1mg/50mg左右，脂質體的粒