太平洋磷蝦磷脂提取及磷脂酰膽堿的分離純化研究.pdf

1、海洋生物是磷脂的優(yōu)質(zhì)來源，且含有大量的多不飽和脂肪酸(PUFA)，尤其是EPA(二十碳五烯酸)、DHA(二十二碳六烯酸)等n-3系列多不飽和脂肪酸(n-3PUFA，也稱ω-3系列多不飽和脂肪酸、ω-3 PUFA)，這使得在海洋生物機體內(nèi)形成了含有獨特脂肪酸成分的磷脂，即DHA/EPA磷脂。DHA/EPA磷脂(尤其DHA/EPA-PC)除具有磷脂及不飽和脂肪酸(DHA、EPA)的雙重生理功能外，還因其結(jié)構(gòu)為特殊脂肪酸與磷脂分子骨架的結(jié)合，

2、而具有諸多獨特生理功能，例如:保護視力、提高學(xué)習(xí)能力、防治心血管疾病、抗癌、增加細胞膜流動性等。因此，DHA/EPA磷脂在醫(yī)藥保健方面具有極大的開發(fā)利用價值。
　　但目前市面上磷脂主要分為大豆磷脂和卵黃磷脂兩種。而對富含DHA、EPA的海洋源磷脂的研究相對較少，尤其是對海洋源磷脂酰膽堿的研究鮮見報道。
　　本研究以山東半島海域優(yōu)勢蝦種太平洋磷蝦為原料，以建立適宜工業(yè)生產(chǎn)的低成本、高效、綠色太平洋磷蝦磷脂和太平洋磷蝦PC的提取

3、及分離純化工藝為目標(biāo)，首先開展太平洋磷蝦磷脂的提取純化工藝研究，然后以得到的太平洋磷蝦磷脂為原料，進行太平洋磷蝦PC的分離純化工藝研究并進行工藝優(yōu)化。具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　首先，以太平洋磷蝦粉為原料，以產(chǎn)物太平洋磷蝦磷脂純度及回收率為指標(biāo)，對各項影響因素進行單因素試驗及正交試驗，優(yōu)化乙醇提取太平洋磷蝦粗磷脂的工藝條件。最終確定最佳實驗條件為:先乙醇提取后有機溶劑脫中性脂為實驗工藝流程，提取溶劑為95％乙醇、液固比5∶1、提

4、取溫度40℃、提取時間3h、搖床輔助混合、提取次數(shù)2次。在最優(yōu)提取條件下，所制粗磷脂產(chǎn)品中太平洋磷蝦磷脂回收率為90.13％，純度為28.65％。
　　其次，以最優(yōu)條件下制得的太平洋磷蝦粗磷脂為原料，以產(chǎn)物太平洋磷蝦磷脂純度及回收率為指標(biāo)，對脫中性脂工藝中各因素進行了優(yōu)化，最優(yōu)脫中性脂工藝條件為:以丙酮為脫中性脂試劑，液固比10∶1，超聲時間25min，超聲功率250w，超聲溫度40℃，脫中性脂次數(shù)2次。最優(yōu)條件下所得產(chǎn)品中太平洋

5、磷蝦磷脂回收率為89.26％，純度由28.65％提高至52.93％。采用薄層層析掃描法，分析太平洋磷蝦磷脂主要組分及其含量，其中太平洋磷蝦PC含量為49.68％，另有5.32％PE及較多SM、LPC。以太平洋磷蝦磷脂作為原料，用柱層析法對其進行進一步分離純化。
　　第三，以自制太平洋磷蝦磷脂為原料，以產(chǎn)物太平洋磷蝦PC純度及回收率為指標(biāo)，優(yōu)化柱層析實驗條件。最終選擇溶劑用量小，譜帶重疊度低的中性氧化鋁作為分離純化太平洋磷蝦PC柱層

6、析實驗的固定相，最優(yōu)柱層析條件為:層析柱徑高為D25×300mm，固定相為100～200目中性氧化鋁，流動相為95％乙醇，上載量為0.3g/g氧化鋁，洗脫速度為3mL/min。在此條件下純化產(chǎn)物太平洋磷蝦PC回收率達到65.33％，純度達到94.29％。
　　最后，對太平洋磷蝦PC進行主要理化指標(biāo)及脂肪酸組分進行測定，太平洋磷蝦PC中含有豐富的不飽和脂肪酸，其中DHA+EPA含量達到總脂肪酸的30％以上。對太平洋磷蝦PC在貯存過程