spo0A基因突變對解淀粉芽孢桿菌PEBA20生物膜和抑菌活性的影響.pdf

1、本研究主要對植物內(nèi)生生防細(xì)菌解淀粉芽孢桿菌（Bacillus.amyloliquefaciens）PEBA20菌株的spo0A基因進(jìn)行了檢測，spo0A基因不僅對細(xì)菌生物膜形成具有調(diào)控作用，而且是芽孢形成的主要調(diào)控基因，更進(jìn)一步的協(xié)調(diào)了細(xì)菌抑菌活性、運(yùn)動性等多種細(xì)胞進(jìn)程。利用同源重組法構(gòu)建了spo0A基因缺失突變株，進(jìn)而驗(yàn)證了該基因?qū)獾矸垩挎邨U菌PEBA20菌株運(yùn)動性、生物膜形成、抑菌活性和芽孢形成的影響。
　　本文主要研究結(jié)果

2、如下:
　　1、對B.amyloliquefaciens PEBA20野生株、多株自然突變株和人工突變株的簇動性進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，解淀粉芽孢桿菌的簇動表型具有多樣性，而基因的突變會影響簇動表型的變化。
　　2、將實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)獲得的spo0A同源前臂和同源后臂的連接質(zhì)粒spo0AF-spo0AB（于占翠2012年）與自殺質(zhì)粒pWM91經(jīng)酶切、T4連接酶連接得到重組質(zhì)粒spo0AF-spo0AB-pWM91。將構(gòu)建得到的重組質(zhì)粒

3、經(jīng)電轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化入B.amyloliquefaciens PEBA20感受態(tài)細(xì)胞中，采用氨芐和蔗糖兩步篩選法獲得spo0A基因缺失的PEBA20突變株。以缺失株DNA為模板進(jìn)行PCR篩選陽性克隆，并通過測序進(jìn)一步確定獲得spo0A基因缺失突變株△spo0A。
　　3、檢測B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和△spo0A菌株的運(yùn)動性差異。結(jié)果表明，突變株與野生株相比，依賴鞭毛的簇動能力減弱，但是簇動表型分化較

4、野生株復(fù)雜;依賴菌毛的推動性結(jié)果顯示突變株擴(kuò)散范圍較大，但是粘附力與野生株相比要較弱。
　　4、對B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和△spo0A菌株在固氣界面生物膜動態(tài)形成特點(diǎn)進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，野生株與突變株均有形成生物膜的能力，但是與野生株相比，△spo0A菌株復(fù)雜程度退化，生物膜結(jié)構(gòu)相對簡單，褶皺不明顯。靜置培養(yǎng)條件下，檢測氣液界面生物膜動態(tài)形成過程。結(jié)果表明，在氣液界面野生株具有形成復(fù)雜褶皺結(jié)構(gòu)生

5、物膜的能力，而△spo0A菌株不具備形成生物膜的能力。因此，spo0A基因缺失突變可導(dǎo)致生物膜形成功能退化以致于喪失。
　　5、對B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和△spo0A菌株的菌體芽孢形態(tài)檢測結(jié)果顯示，spo0A基因缺失突變導(dǎo)致菌株完全喪失了產(chǎn)孢能力，且突變株的菌體與野生株相比較為短小。
　　6、檢測B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和△spo0A菌株對四種真菌和三種細(xì)