肺炎克雷伯菌生物膜對機(jī)體免疫功能的影響.pdf

1、第一部分肺炎克雷伯菌生物膜的體外模型建立
　　 目的：
　　 以硅膠片為載體，體外建立肺炎克雷伯菌生物膜。
　　 方法：
　　 采用改良平板法在體外建立KP生物膜模型：將能形成生物膜的20株肺炎克雷伯菌制備成1個(gè)麥?zhǔn)蠞岫葐挝坏木?，每株菌?00ul菌液、800ul的LB肉湯培養(yǎng)液、1cm×1cm無菌硅膠片放入24孔平底組織培養(yǎng)板中，37℃恒溫連續(xù)靜止培養(yǎng)5天。用高倍鏡和掃描電鏡鑒定細(xì)菌生物膜的形成。

2、r>　　 結(jié)果：
　　 經(jīng)過5天培養(yǎng)，將硅膠片干燥固定后在電鏡下成像可見上細(xì)菌團(tuán)狀聚集，彼此之間有較多纖維樣物膠連，細(xì)菌呈立體分層不規(guī)則排列，形成成熟的生物膜。
　　 結(jié)論：
　　 用硅膠片作為載體材料易于獲得，且有較多的接觸面，因此用此方法體外建立肺炎克雷伯菌生物膜是切實(shí)可行的。
　　 第二部分肺炎克雷伯菌生物膜對單核細(xì)胞株THP-1TLR2受體表達(dá)的影響
　　 目的：
　　 研究肺炎

3、克雷伯菌生物膜對單核細(xì)胞株THP-1 TLR2受體表達(dá)的影響，探索細(xì)菌生物膜逃脫宿主免疫防御的機(jī)制。
　　 方法：
　　 以體外建立肺炎克雷伯菌生物膜的合成分泌物處理單核細(xì)胞株THP-1做為實(shí)驗(yàn)組，以等量浮游細(xì)菌的合成分泌物處理單核細(xì)胞株THP-1做為對照組。RT-PCR半定量分析THP-1 TL，R2 mRNA的表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測分析THP-1 TLR2蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)組THP-

4、1 TLR2 mRNA表達(dá)（0.453±0.06），明顯低于對照組（4.872±0.36）（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組TLR2蛋白表達(dá)率（8.42％±3.74％），明顯低于對照組（12.35％±7.36％）（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 細(xì)菌生物膜與浮游細(xì)菌不同的代謝產(chǎn)物能顯著下調(diào)THP-1 TLR2的表達(dá)水平，影響固有免疫進(jìn)而影響適應(yīng)性免疫，可能是生物膜細(xì)菌逃脫機(jī)體免疫防御系統(tǒng)的又一機(jī)制。
　　 第三部分肺

5、炎克雷伯菌生物膜對小鼠巨噬細(xì)胞免疫功能的影響
　　 目的：
　　 研究肺炎克雷伯菌生物膜對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLRs和細(xì)胞因子表達(dá)的影響，探索機(jī)體抗BF感染免疫的特點(diǎn)。
　　 方法：
　　 將雄性昆明種小鼠40只隨機(jī)分成2組，一組腹腔植入體外形成肺炎克雷伯菌生物膜的硅膠片，建立留置性醫(yī)療裝置BF感染模型實(shí)驗(yàn)組，另一組植入與實(shí)驗(yàn)組同等量的浮游菌作為對照組。實(shí)時(shí)定量PCR分析兩組巨噬細(xì)胞TLRs mRNA的表達(dá)

6、水平，流式細(xì)胞儀檢測巨噬細(xì)胞TLR蛋白的表達(dá)，雙抗體夾心ELISA法測定細(xì)胞因子的含量。
　　 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)生物膜組巨噬細(xì)胞TLR2、TLR4 mRNA表達(dá)量是對照浮游菌組的0.23和0.24倍；而TLR5、TL，R9兩組表達(dá)差異無顯著性；實(shí)驗(yàn)組TLR2、TLR4蛋白表達(dá)率分別是（23.27±2.73，15.83±2.04），明顯低于對照組（33.42±3.72，21.75±1.25，）（P<0.01）。實(shí)驗(yàn)生物膜