肺炎克雷伯菌RcsAB對(duì)菌株超粘性與生物膜的影響.pdf

1、目的：探討肺炎克雷伯菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控子 RcsAB對(duì)菌株超粘性和生物膜形成能力的影響，通過(guò)構(gòu)建肺炎克雷伯菌rcsA、rcsB及rcsAB基因缺失的無(wú)痕突變株和對(duì)應(yīng)的回補(bǔ)株，對(duì)其菌株超粘性和生物膜表型進(jìn)行測(cè)定，期間以野生株作為對(duì)照，分析RcsAB在菌株超粘性和生物膜形成中的功能。
　　方法：首先構(gòu)建突變株ΔrcsA、ΔrcsB和ΔrcsAB，PCR擴(kuò)增rcsA、rcsB基因上下游同源臂片段，克隆到質(zhì)粒pKO3-Km上，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入肺炎克

2、雷伯菌NTUH-K2044中，經(jīng)同源重組后篩選得到無(wú)痕突變株。然后構(gòu)建回補(bǔ)株，擴(kuò)增rcsA、rcsB基因片段，克隆到質(zhì)粒pBAD33上，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入相應(yīng)突變株，得到回補(bǔ)株。粘度實(shí)驗(yàn)測(cè)定野生株、突變株、回補(bǔ)株的超粘性。用結(jié)晶紫染色的方法測(cè)定菌體生物膜形成能力。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建rcsA、rcsB基因缺失的無(wú)痕突變株ΔrcsA、ΔrcsB、ΔrcsAB和回補(bǔ)株C-ΔrcsA、C-ΔrcsB、C-rcsA-ΔrcsAB、C-rcsB