粘性放線菌單菌種早期生物膜的連續(xù)觀察及胞外多糖合成的研究.pdf

1、對(duì)粘性放線菌單菌種生物膜的形成過(guò)程進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察，并比較生物膜形成過(guò)程中細(xì)菌合成胞外多糖的能力，以此了解粘性放線菌生物膜形成過(guò)程中的結(jié)構(gòu)演化特點(diǎn)，并探討胞外多糖在粘性放線菌生物膜形成各個(gè)階段的可能作用。 方法：粘性放線菌在靜止培養(yǎng)基的玻片上形成生物膜，用BOBO<,TM>-3和Calcoflour<'TM>分別對(duì)細(xì)菌和胞外多糖進(jìn)行染色，在CLSM下觀察生物膜結(jié)構(gòu)變化及細(xì)菌與多糖的空間分布。同樣條件下形成生物膜，用蒽酮-硫酸法測(cè)

2、定細(xì)菌合成胞外水溶性多糖與水不溶性多糖的含量。 結(jié)果：1．粘性放線菌生物膜的形成可分三個(gè)階段：初始粘附期(12小時(shí)以前)，生物膜發(fā)展期(12-24小時(shí))，生物膜成熟期(24小時(shí)以后)。2．細(xì)菌在玻片上首先形成細(xì)絲狀(filamentous)的粘性物質(zhì)，疏松易洗脫，之后在12小時(shí)左右形成相對(duì)牢固的不易洗脫的堆積粘附物，此時(shí)也發(fā)現(xiàn)水不溶性胞外多糖的含量出現(xiàn)一個(gè)劇增峰值(P<0.05)。3．在生物膜的發(fā)展期，細(xì)菌生長(zhǎng)與多糖堆積迅速，空

3、間分布一致，且可看到此階段早期整個(gè)生物膜呈細(xì)菌與多糖的大量團(tuán)塊堆積，無(wú)明顯的生物膜結(jié)構(gòu)，而晚期細(xì)菌與多糖出現(xiàn)了典型的成熟生物膜結(jié)構(gòu)，細(xì)菌緊密包裹在胞外多糖基質(zhì)中，其間充滿孔隙，表面布滿溝壑。4．成熟期，生物膜抗流體沖擊能力明顯增強(qiáng)，CLSM下有典型的成熟生物膜結(jié)構(gòu)，在生物膜內(nèi)部還有未被基質(zhì)包裹的散在細(xì)菌。 結(jié)論：1．粘性放線菌能夠在無(wú)獲得性膜的無(wú)機(jī)物體表面形成穩(wěn)定的單菌種生物膜，而水不溶性胞外多糖是生物膜粘附發(fā)展的重要前提和基礎(chǔ)