生物合成胞外多糖乳酸桿菌的篩選及條件優(yōu)化研究.pdf

1、乳酸菌胞外多糖是由乳酸菌生長代謝過程中發(fā)酵產(chǎn)生并分泌到胞外的黏液或莢膜多糖。本研究采用苯酚-硫酸法從117株乳酸菌中篩選出1株產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌，菌株代號(hào)為NM18，對其進(jìn)行形態(tài)特征觀察為桿狀細(xì)菌，通過16S rDNA基因序列分析，PCR擴(kuò)增得到1478bp基因序列，PCR產(chǎn)物序列通過Blast軟件在NCBI中進(jìn)行同源性比較，并結(jié)合API50糖類發(fā)酵實(shí)驗(yàn)最終將菌株NM18鑒定為植物乳桿菌。
　　通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)，確定菌株N

2、M18合成胞外多糖最佳培養(yǎng)基配方和發(fā)酵條件為大豆蛋白胨12.0g/L、牛肉浸膏11.0g/L、酵母粉5.0g/L、蔗糖28.0g/L、檸檬酸鈉水化合物6.0g/L、無水乙酸鈉6.0g/L、吐溫-801.0mL/L、初始pH值6.5、發(fā)酵溫度37℃、發(fā)酵時(shí)間34h及最佳接種量1.5％。并且，蛋白胨、牛肉浸膏、酵母粉、蔗糖、吐溫-80、無水乙酸鈉等因素對胞外多糖的合成具有顯著影響(p＜0.05)，在此條件下菌株NM18在胞外多糖合成量達(dá)到2

3、38.1mg/L，與未優(yōu)化發(fā)酵條件相比胞外多糖合成量提高25.2％。
　　通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)，確定菌株NM18合成胞外多糖的最佳提取條件，即乙醇濃度80.0％、乙醇添加倍數(shù)4.0、三氯乙酸濃度4.0％、醇沉?xí)r間24h、起始pH值5.5、離心速度16000 r/min及離心時(shí)間35min,其中乙醇濃度、醇沉?xí)r間、起始pH值及離心時(shí)間對胞外多糖的提取具有顯著影響(p＜0.05)。在此條件下，胞外多糖提取量可達(dá)295.0mg/L;