碳源對(duì)干酪乳桿菌LC2W胞外多糖的生物合成及免疫活性的影響.pdf

1、近年來(lái)，乳酸菌胞外多糖受到越來(lái)越多的關(guān)注，除了可以改善產(chǎn)品的質(zhì)地如口感和粘稠度外，它還有很好的生理活性，如：抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等。本文對(duì)干酪乳桿菌LC2W胞外多糖的生物合成、分離純化、結(jié)構(gòu)和免疫活性等進(jìn)行了系統(tǒng)研究。 以MRS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，對(duì)影響干酪乳桿菌LC2W產(chǎn)胞外多糖的主要營(yíng)養(yǎng)因子：葡萄糖、酪蛋白胨和酵母提取物進(jìn)行了單因素及正交試驗(yàn)，確定培養(yǎng)基組成為葡萄糖60.0g/L，酪蛋白胨16.0g/L，酵母提取物10.0 g/L，牛

2、肉膏粉8.0g/L，磷酸氫二鉀2.0g/L，吐溫-80 1.0ml/L，檸檬酸氫二銨2.0g/L，乙酸鈉5.0g/L，硫酸鎂0.2g/L，硫酸錳0.04g/L。 采用響應(yīng)面分析法(RSM)對(duì)影響干酪乳桿菌LC2W合成胞外多糖的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。確定的最適培養(yǎng)條件為：接種量4％，發(fā)酵溫度31.5℃，發(fā)酵時(shí)間32h。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，在此條件下胞外多糖的產(chǎn)量可達(dá)157.46 mg/L。此外研究還發(fā)現(xiàn)控制pH 6.0左右發(fā)酵，EPS

3、的產(chǎn)量可達(dá)371.90mg/L，是未控制pH時(shí)產(chǎn)量的2.36倍。 對(duì)影響干酪乳桿菌LC2W胞外多糖提取的主要工藝參數(shù)進(jìn)行了研究。單因素和正交試驗(yàn)結(jié)果表明，用截留分子量為10KD的超濾膜將發(fā)酵上清液濃縮4倍后，用終濃度為6％的三氯乙酸脫蛋白，再用5倍體積95％乙醇4℃沉淀24h，多糖提取效果較佳。在此條件下，蛋白脫除率可達(dá)88.35％，EPS提取率可達(dá)92.17％。 分別以葡萄糖、乳糖為碳源合成的粗多糖經(jīng)過(guò)DEAE Sep

4、harose Fast Flow離子交換柱分級(jí)純化均得到三個(gè)組分：G1、G2、G3和L1、L2、L3。分別為粗多糖質(zhì)量的21.33％、33.53％、29.67％和36.73％、18.51％、21.67％，總回收率為84.53％和76.9l％。G1、G2和L1、L2為中性多糖，在Sepharose CL-6B和HPLC上都顯示均一組分。 運(yùn)用紫外光譜、紅外光譜、HPLC和氣相色譜對(duì)兩種碳源獲得的單一組分G1、G2和L1、L2的結(jié)構(gòu)

5、進(jìn)行了初步分析。紫外光譜分析都不含蛋白和核酸；紅外光譜分析Gl、G2和L1、L2均呈現(xiàn)多糖的特征峰，但波形、特征吸收波段、波峰強(qiáng)度有些差異；HPLC測(cè)定G1、G2、L1和L2的平均分子量分別為6.65×105Da、1.01×104 Da、2.25×106Da和1.36×104Da；氣相色譜分析G1、G2和L1、L2的主要單糖組成摩爾比分別為：鼠李糖：葡萄糖：半乳糖=3.07:3.29:1；鼠李糖：葡萄糖：半乳糖：2.84:6.4:1；甘

6、露糖：葡萄糖：半乳糖=17.24:6.03:1；甘露糖：葡萄糖：半乳糖=28.71:5.98:1。體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明，G1、G2和L1、L2均無(wú)細(xì)胞毒性，在5-80ug/ml，的濃度范圍內(nèi)L1對(duì)B淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用比G1強(qiáng)，具有明顯的劑量效應(yīng)，其抑制作用與濃度呈負(fù)相關(guān)；與此相反，在5-80ug/mL的濃度范圍內(nèi)，G2對(duì)B淋巴細(xì)胞增殖抑制作用比L2強(qiáng)，表現(xiàn)為明顯的劑量效應(yīng)，其抑制作用與濃度呈正相關(guān)。 因此，碳源的改變會(huì)影