胞外泛素對(duì)Treg細(xì)胞免疫抑制活性的影響.pdf

1、背景與目的：CD4+CD25+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)在維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)，特別是免疫耐受中具有重要作用，其作用的發(fā)揮主要是通過(guò)調(diào)控CD4+CD25-效應(yīng)性T細(xì)胞（Teff細(xì)胞）的功能來(lái)實(shí)現(xiàn)的。Treg細(xì)胞的數(shù)量和活性與自身免疫性疾病密切相關(guān)，因此如何有效調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞數(shù)量和活性已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。前期研究發(fā)現(xiàn)泛素在血液制劑的貯存過(guò)程中濃度明顯升高，且與保存時(shí)間正相關(guān)。而泛素受體CXCR4在Treg細(xì)胞表面高表達(dá)，與Tre

2、g細(xì)胞的趨化遷移、免疫耐受的誘導(dǎo)以及抗腫瘤免疫作用密切相關(guān)，本研究探討泛素是否通過(guò)結(jié)合Treg細(xì)胞表面受體CXCR4進(jìn)而影響Treg細(xì)胞的免疫抑制活性。
　　方法：將正常人外周血的單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)與不同濃度N末端標(biāo)記FITC熒光的泛素37℃共孵育1小時(shí)，流式細(xì)胞儀初步分析泛素與人PBMCs中Treg細(xì)胞的結(jié)合能力;用磁珠分選的Treg細(xì)胞與N末端標(biāo)記FITC熒光的泛素37℃共孵育1小時(shí)，流式細(xì)胞儀再次驗(yàn)證胞外泛素與Treg

3、細(xì)胞的結(jié)合率，并得出兩者結(jié)合的最適泛素濃度;運(yùn)用Transwell方法分析不同濃度泛素(0、0.2、0.4、0.6和0.8μM)對(duì)人PBMCs中Treg細(xì)胞趨化遷移能力的影響;最后胞外泛素對(duì)Treg細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制功能的影響通過(guò)Treg細(xì)胞與Teff細(xì)胞共培養(yǎng)后檢測(cè): CFSE標(biāo)記的Teff細(xì)胞與Treg細(xì)胞按照1∶0、1∶1、1∶2和1∶3的比例共培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)72小時(shí)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)Treg細(xì)胞對(duì)Teff細(xì)胞增殖的影響;CFSE標(biāo)

4、記的Teff細(xì)胞與Treg細(xì)胞按照1∶1的比例共培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組加入最適濃度泛素，對(duì)照組不加泛素，37℃孵育72小時(shí)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)泛素對(duì)Treg細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制功能的影響;胞外泛素對(duì)人外周血Treg細(xì)胞凋亡的作用:Treg細(xì)胞與不同濃度泛素(0、0.2、0.4、0.6和0.8μM)置于37℃孵育箱中共培養(yǎng)48小時(shí)，收集細(xì)胞，加AnnexinⅤ和PI，流式細(xì)胞儀檢測(cè)泛素對(duì)Treg細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：胞外泛素可以與PBMCs中的

5、Treg細(xì)胞和磁珠分選Treg細(xì)胞結(jié)合，結(jié)合率分別為1.26±0.11％和17.93±1.81％，95％ CI分別為1.00％-1.52％和13.64％-22.23％，兩者結(jié)合的最適濃度泛素為0.6μM;泛素可以影響Treg細(xì)胞的趨化遷移，當(dāng)泛素濃度為0.6μM時(shí)，該影響作用較明顯;Treg細(xì)胞可以抑制Teff細(xì)胞的增殖，隨著共培養(yǎng)體系中Treg細(xì)胞比例的增大，其免疫抑制功能增強(qiáng)，胞外泛素可以促進(jìn)Treg細(xì)胞的免疫抑制功能;一定濃度泛素