成人胰島細胞分離純化及免疫抑制劑對胰島細胞功能影響的試驗研究.pdf

1、研究目的：1在現(xiàn)有的設備及試驗條件下，改進胰島分離、純化技術，獲得較大量的有活性的胰島團簇。探討胰島分離純化方法及胰島細胞移植物質(zhì)量的鑒定方法。2.通過體外人胰島細胞培養(yǎng)及糖刺激胰島素釋放試驗，探討免疫抑制劑對人胰島細胞的直接毒性作用，旨在篩選適用于胰島細胞移植的免疫抑制劑。設計既能有效的免疫抑制且對胰島存活毒性小的免疫抑制方案。為臨床移植提供理論依據(jù)。 研究方法：完善尸體胰腺切取技術，減少冷熱缺血時間，經(jīng)胰導管逆行注入膠原酶，

2、采用膽總管內(nèi)逆行灌注膠原酶消化分離胰島，F(xiàn)icoll間斷密度梯度離心法提純胰島，采用DTZ和AO-PI聯(lián)合染色及糖刺激胰島素釋放試驗鑒定胰島的純度、數(shù)量和活率和功能質(zhì)量。通過人胰島細胞同不同免疫抑制劑分別共同培養(yǎng)后的糖刺激胰島素釋放試驗，ELISA檢測培養(yǎng)液中胰島素含量比較，以探討免疫抑制劑對胰島素的毒性作用。 結(jié)果：1.人的胰腺經(jīng)消化分離提出后胰島產(chǎn)量為80×1000胰島當量，平均活率在95％以上，純度在80％以上。胰島素釋放

3、試驗顯示高糖刺激后胰島素釋放量為低糖的2.8倍，表明胰島細胞功能良好。2.與對照組相比，各藥物添加組胰島素釋放均有變化，除5ng/ml它可莫斯組的在低糖濃度時胰島素釋放增大外，其余各組在低糖、高糖濃度作用下胰島素釋放減少。低糖組，與對照組相比只有25ng/ml它可莫斯組有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；高糖作用下，高濃度的環(huán)孢霉素、雷帕霉素、霉酚酸酯和中、高它可莫斯同對照組有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，其他各組沒有統(tǒng)計學意義。在相同藥物隨著

4、濃度的增高而減少，但是沒有統(tǒng)計學意義。與對照組相比，所有添加藥物組刺激指數(shù)都下降，只有高濃度(25ng/ml)它可莫斯組有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其余各組無明顯差異。 結(jié)論：改良的酶法分離、Ficoll梯度離心法純化胰島，是當今條件下可行的胰島分離提純方法。DTZ染色、AO/PI雙色熒光染色和糖刺激胰島素釋放試驗三者結(jié)合是鑒定胰島移植物數(shù)量與質(zhì)量的一種簡單、可靠的方法。2.現(xiàn)在臨床應用的高濃度免疫抑制劑和中濃度的普樂可復對胰