保存全血中胞外泛素對輸血相關免疫調(diào)節(jié)影響的初步研究.pdf

1、目的：全血保存過程中蓄積在血漿中的生物活性分子輸入患者體內(nèi)后調(diào)節(jié)免疫反應。在引起輸血相關免疫調(diào)節(jié)的生物活性分子中，保存血漿中的游離泛素可能起到很重要的作用，可能作為主要作用物質(zhì)，也可能協(xié)同其它活性分子共同作用。本次實驗檢測全血儲存過程中，血漿中胞外泛素濃度改變在體外實驗中對人外周血單個核細胞分泌細胞因子及細胞因子mRNA表達的影響，初步探討胞外泛素對Th1/Th2細胞分化的影響，分析泛素在輸血相關免疫調(diào)節(jié)中的作用。
　　方法：(1

2、)血庫專用白細胞濾器過濾新鮮采集的正常供者全血做為去白細胞全血，未過濾白細胞的全血作為對照。(2)收集不同保存時間的全血血漿，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測儲存過程中全血血漿中的泛素濃度。(3)通過增加外源性泛素以及用泛素抗體封閉35天保存血漿中泛素，觀察保存全血血漿中泛素對淋巴細胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-8和IL-10分泌的影響，各細胞因子用ELISA試劑盒檢測。(4)采用熒光定量PCR基因擴增技術，檢

3、測炎性細胞因子TNF-α、IL-8mRNA表達水平的改變，同時檢測Th1細胞因子IFN-γ，Th1轉錄調(diào)節(jié)因子T-bet，Th2細胞因子IL-4，Th2轉錄調(diào)節(jié)因子STAT6 mRNA表達水平的改變，進而觀察Th1/Th2細胞分化改變
　　結果：隨著儲存時間延長，35天的去白細胞和未去白細胞全血血漿中泛素濃度升高了146倍和73倍，分別從0天的(18.35±11.87)ng/mL升高到(865.11±83.58)ng/mL，(20

4、.19±10.23) ng/mL升高到(631.01±97.05) ng/mL。35天全血血漿及0天加泛素血漿（泛素濃度等同于35天全血血漿）抑制人類外周血單個核細胞分泌炎性細胞因子TNF-α、IL-2、Th1細胞因子IFN-γ，促進IL-8及Th2細胞因子IL-4分泌。同時，35天去白細胞全血血漿及0天去白細胞加泛素全血血漿（泛素濃度與35天去白細胞全血血漿等同）抑制人外周血單個核細胞TNF-αmRNA及Th1細胞因子IFN-γ和Th

5、1轉錄調(diào)節(jié)因子T-bet mRNA的表達;促進IL-8mRNA及Th2細胞因子IL-4和Th2轉錄調(diào)節(jié)因子STAT6mRNA的表達。全血血漿對以上細胞因子分泌及mRNA表達的促進或抑制作用可以被泛素抗體解除。
　　結論：儲存全血血漿中升高的泛素在輸血相關免疫調(diào)節(jié)機制中發(fā)揮重要作用，可引起淋巴細胞因子分泌偏移，Th1/Th2細胞分化偏向Th2方向，Th1細胞分化受抑制，機體細胞免疫功能受抑制，抗腫瘤及抗感染能力下降。儲存全血中的胞外