極地微生物胞外多糖免疫活性的初步研究.pdf

1、胞外多糖（exopolysaccharide，EPS）是微生物在生長代謝過程中分泌到細胞外形成的易與菌體分離的可溶性多糖及多糖復合物，在細胞間信息交換、細胞粘附等方面具有重要作用。在南極中生存著大量可產生胞外多糖的極端微生物，EPS合成系統是南極微生物最常見的保護機制之一，EPS可以降低低溫、高鹽、強輻射等極端環(huán)境條件對微生物自身造成的損害。由于在極端環(huán)境下形成的微生物EPS具有不同的特性和功能活性，因此其在食品加工、新藥研發(fā)等領域具有

2、較大的應用潛力。
　　本研究采用苯酚硫酸法和醇沉法從600余株南極微生物中篩選出10株胞外多糖產量較高的菌株，其編號分別為8-6-6-2、4-1-9-1、20＃3、DY2-2、8-11-3-1、29-2、4-3-1、3-3-1-2、4-6-8-1和185，其中菌株3-3-1-2胞外粗多糖產量達0.6 g/L。分子鑒定與系統發(fā)育分析表明，除菌株4-3-1屬于嗜冷桿菌屬(Psychrobacter)外，其余9株菌株均屬于假交替單胞菌屬

3、(Pseudoalteromonas)。根據酶活趨勢分析試驗結果，初篩實驗條件確定為：注射劑量為3mg/mL，分別測定實驗第3d和第5d的免疫相關酶活性。大菱鲆非特異性免疫活性初篩試驗發(fā)現，8株菌產生的EPS均在不同程度上提高了大菱鲆血清中 AKP、ACP、T-SOD、CAT和LSZ的活性，表明其對大菱鲆的非特異性免疫活性具有促進作用。EPS20＃3在7項初篩指標中有6項效果較好，DY2-2、3-3-1-2、4-6-8-1在7項初篩指標

4、中有4項效果較好，選取該4株菌株產生的EPS，以黃芪多糖為陽性對照進行復篩試驗。實驗結果表明，EPS20＃3和3-3-1-2對大菱鲆血清免疫酶活性的增強效果較好。對大菱鲆抗鰻弧菌感染實驗表明，EPS20＃3、3-3-1-2的感染率分別為70％和40%，低于對照組的100%。實驗結果表明，EPS20＃3、3-3-1-2提高了大菱鲆非特異性免疫能力。菌株Pseudoalteromonas sp.3-3-1-2產生的EPS對刺參體腔液非特異性

5、免疫指標和存活率等影響的研究發(fā)現，該EPS可以明顯提高刺參的免疫性能。注射EPS濃度為4 mg/mL的實驗組免疫增強效果較為明顯，整個試驗期間實驗組ACP活性比對照組至少提高了14%，最高提高了134%；實驗第35d時LSZ酶活最大，該天酶活比對照組酶活提高了96%；第7 d，實驗組T-SOD活力比對照組提高了132%；28 d時，實驗組MDA含量比對照組降低了82%；試驗期間該實驗組的存活率始終維持在100%，遠遠高于對照組的60%。

6、該結果表明，菌株 Pseudoalteromonas sp.3-3-1-2產生的EPS可作為免疫添加劑使用。通過單因子實驗，確定菌株Pseudoalteromonas sp.3-3-1-2產EPS的最佳碳源為蔗糖，最佳添加量為4%；最佳氮源為酵母浸膏，最佳添加量為5%；最佳培養(yǎng)基初始pH為9；最佳發(fā)酵溫度為10℃；最佳裝液量為150/500 mL；最佳接種量為3%。對該菌株產生的EPS進行了DEAE-Sepharose fast flo