不同培養(yǎng)條件海洋微生物胞外多糖的結(jié)構(gòu)與免疫活性研究.pdf

1、本文從2株海洋微生物在6種不同培養(yǎng)基中的發(fā)酵液中提取得到12種胞外粗多糖，在對其進(jìn)行基本理化性質(zhì)分析基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對其免疫活性進(jìn)行了研究。主要研究結(jié)果如下：
　　1.在12種胞外粗多糖中，AF3、AF2、SEK1及SEK3多糖得率較高，分別為10.1％，9.7%，8.0%及7.9%。運(yùn)用高效液相色譜法（HPLC）、紅外光譜（IR）、高效凝膠滲透色譜法（HPGPC）等方法對所有胞外粗多糖的單糖組成、官能團(tuán)性質(zhì)及分子量等進(jìn)行了分析比較

2、。結(jié)果表明12種胞外粗多糖均不含糖醛酸；AF4，AF6，SEK4均不含硫酸根，其余樣品含有少量硫酸根。AF4，AF6及SEK4中主要是Glc，分別為85.5%，80.4%和87.0%；AF1，AF3，SEK5及SEK6的中主要為Man和Glc，分別占總單糖比例的72.5%，80.7%，81.9%和81.3%；AF2、SEK1、SEK2、SEK3中主要是Man，分別達(dá)66.5%、67.5%、52.9%、73.5%。
　　2.以含Ma

3、n含量高且多糖得率高的AF3為對象，通過732＃陽離子交換柱層析、Capto Q陰離子交換柱層析及Sepharyl S100凝膠柱層析對其進(jìn)行分離純化，得到多糖組分AF3-A1及AF3-A2，其中AF3-A1相對分子量32kDa，總糖含量85.9%，不含蛋白以及硫酸根、糖醛酸等酸性基團(tuán)，單糖種類主要含有Man（＞95%），屬于中性甘露聚糖。通過甲基化GC/MS、NMR、MS等方法對純化后多糖組分AF3-A1結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，表明，AF3-A

4、1是以(1→6)-α-D-Manp為主鏈，C-2位存在一定分支結(jié)構(gòu)，是由聚合度從2-5不等的β-D-Manp和(1→2)-α-D-Manp的甘露聚糖組成。
　　3．粗多糖AF3經(jīng)Capto Q陰離子交換柱分離純化0.6M鹽洗得到的組分AF3-A2的相對分子量82kDa，總糖含量79%，蛋白含量15%，不含硫酸根、糖醛酸等酸性基團(tuán)；單糖中以甘露糖與半乳糖的摩爾比為8.3:1.7，是主要含甘露糖的雜多糖，屬于半乳甘露聚糖肽。同樣通過甲

5、基化GC/MS、NMR、MS等方法對AF3-A2多糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析。結(jié)果表明AF3-A2是以α-D-(1→6)-Manp為主鏈，C-2位存在一定的分支結(jié)構(gòu)，其支鏈中的一部分是由聚合度從2-5不等的α-D-(1→2)Manp、α-D-(1→2)-Manp-α-D-(1→3)-Manp及β-D-Galf(1→組成。
　　4．對12種不同培養(yǎng)條件海洋微生物胞外多糖、2種純化多糖及2種甘露寡糖混合物體外對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行研究。結(jié)果表明，

6、微生物多糖體外對正常小鼠脾淋巴細(xì)胞、胸腺淋巴細(xì)胞增殖能力普遍高于甘露聚糖肽注射液的增殖能力，且在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴趨勢；粗多糖體外對正常小鼠脾淋巴細(xì)胞、胸腺淋巴細(xì)胞增殖作用普遍高于純化后多糖及甘露聚寡糖混合物；樣品與陽性對照品ConA及LPS發(fā)生協(xié)同作用，共同促進(jìn)正常小鼠免疫細(xì)胞代謝活力；粗多糖AF3及SEK1體外對正常小鼠胸腺細(xì)胞具有促進(jìn)作用，可以顯著增強(qiáng)正常小鼠胸腺細(xì)胞代謝活力。另外在這16種胞外多糖及寡糖混合物體外抗H1N1活性