交替氧化酶對白念珠菌生物膜形成的影響.pdf

1、目的：探討白念珠菌呼吸途徑對其生物膜形成的影響。
　　方法：
　　1、通過XTT法檢測加入呼吸鏈阻滯劑的白念珠菌所形成的生物膜的代謝活性。
　　2、通過熒光顯微鏡和XTT法觀察白念珠菌GOA1基因缺失株（GOA31）、GOA1基因恢復(fù)株（GOA32）、AOX1a基因缺失株（AOX1）以及AOX1b基因缺失株（AOX2）的生物膜形成情況。
　　3、通過RT-PCR的方法檢測白念珠菌菌株GOA31、GOA32、AOX

2、1以及AOX2生物膜形成細(xì)胞黏附相關(guān)基因BCR1、ALS1、ALS3、ECE1以及HWP1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、XTT法檢測不同呼吸鏈阻滯劑對白念珠菌生物膜的影響：分別加入經(jīng)典線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、復(fù)合體Ⅱ、復(fù)合體Ⅲ、復(fù)合體Ⅳ和交替氧化酶阻滯劑后白念珠菌形成的生物膜活性與空白對照組形成的生物膜活性比值分別為0.860±0.062（P＞0.05），1.034±0.052（P＞0.05），2.396±0.900（P＜

3、0.01），1.348±0.167（P＜0.01），0.238±0.010（P＜0.01）。
　　2、XTT法檢測白念珠菌菌株GOA31、GOA32、AOX1和AOX2形成的生物膜代謝活性：GOA31、GOA32、AOX1以及AOX2形成的生物膜活性與SC5314形成的生物膜活性比值分別為0.813±0.172（P＞0.05）、1.067±0.075（P＞0.05）、0.223±0.091（P＜0.05）、1.133±0.110（

4、P＞0.05）。
　　3、倒置熒光顯微鏡下觀察白念珠菌菌株GOA31、GOA32、AOX1和AOX2所形成的生物膜形態(tài)：GOA31、GOA32以及AOX2形成的生物膜形態(tài)較野生株SC5314無明顯區(qū)別，均含豐富的細(xì)胞外基質(zhì)及菌絲相細(xì)胞，而AOX1形成的生物膜量明顯減少，僅可見散在念珠菌孢子，缺乏菌絲相細(xì)胞。
　　4、RT-PCR檢測白念珠菌菌株GOA31、GOA32、AOX1和AOX2生物膜形成細(xì)胞黏附相關(guān)基因的表達(dá)水平：G

5、OA31、GOA32和AOX2中基因ALS1、ALS3、ECE1、BCR1和HWP1表達(dá)水平與SC5314相比，均無明顯差異。然而在AOX1中，基因BCR1和ALS3表達(dá)水平無明顯變化，基因ALS1和ECE1表達(dá)水平降低，基因HWP1表達(dá)水平增高。
　　結(jié)論：
　　1、交替氧化酶呼吸途徑參與白念珠菌生物膜形成,而經(jīng)典線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ和復(fù)合體Ⅱ?qū)Π啄钪榫锬ば纬蔁o明顯影響。
　　2、交替氧化酶基因AOX1a對白念珠