熒光假單胞菌7-14生物膜突變株的篩選及tatC基因的克隆與功能初析.pdf

1、利用mariner轉(zhuǎn)座子對熒光假單胞菌7-14（Pseudomonas fluorescens7-14，pf7-14）進(jìn)行轉(zhuǎn)座誘變，成功構(gòu)建了Pf7-14的突變體文庫。利用96孔板篩選法，從8500多株突變體中篩選得到一株生物膜增強(qiáng)突變株4B5和一株生物膜減弱突變株25C11。通過任意PCR（arbitrary polymerase amplification reaction，arbitrary PCR）和亞克隆技術(shù)鑒定出，4B5的轉(zhuǎn)

2、座子插入的位點(diǎn)與P.fluorescens Pf0-1編碼chemotaxis sensorytransducer的基因，與P fluorescens Pf-5編碼methyl-accepting chemotaxis transducer的基因具有很高的同源性，25C11的轉(zhuǎn)座子插入的位點(diǎn)與P.fluorescens Pf-5和Pf0-1的編碼lipoyltransferase的基因lipB高度同源。根據(jù)Pf0-1和Pf-5相關(guān)基因的

3、序列設(shè)計(jì)簡并引物，從Pf7-14中擴(kuò)增出了對應(yīng)的基因。油菜離體葉片的菌體分布試驗(yàn)表明，和Pf7-14野生型相比，4B5在油菜葉片上粘附的細(xì)胞數(shù)量較多，25C11粘附的細(xì)胞數(shù)量較少。
　　 根據(jù)熒光假單胞菌Pf-5和SBW25的tatC基因序列設(shè)計(jì)簡并引物，采用PCR方法從Pf7-14中克隆了tatC基因，命名為tatCpf7-14。通過序列分析，我們比較了tatCpf7-14與同種、同屬和其它相關(guān)細(xì)菌中tatC基因的核酸序列的同