解淀粉芽孢桿菌HZ-1510殼聚糖酶基因的克隆、重組表達(dá)及其活性研究.pdf

1、甲殼素在自然界中的含量極其豐富，是僅次于纖維素的第二大多聚物，殼聚糖可由甲殼素制備而得。殼聚糖降解產(chǎn)物在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)、工業(yè)等多個行業(yè)中都有著很高的應(yīng)用價值，比如，殼寡糖可以顯著提高魚類的免疫力，是優(yōu)良的水產(chǎn)飼料添加劑。由于殼聚糖的分子量大，溶解度低，使得其直接應(yīng)用往往具有較大的局限性。因此，探索對殼聚糖進(jìn)行高效降解具有重要的理論和生產(chǎn)意義。解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）是廣泛存在于自然界中的芽孢桿菌

2、屬的成員。利用以殼聚糖為唯一碳源的選擇性培養(yǎng)基，我們篩選到一株可以高效降解殼聚糖的解淀粉芽孢桿菌，并開展其殼聚糖酶活性的研究，得到如下結(jié)果:
　　1、根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)、生理生化特征，并結(jié)合16S rDNA和gyrA基因，鑒定該細(xì)菌為解淀粉芽孢桿菌，并對該菌株進(jìn)行命名為HZ-1510。
　　2、克隆了解淀粉芽孢桿菌HZ-1510的殼聚糖酶基因，通過生物信息學(xué)技術(shù)分析了該基因的結(jié)構(gòu)，該殼聚糖酶基因開放讀碼框全長為837bp，可以編

3、碼279個氨基酸，分子量大小為31.45kDa。在其氨基末端具有信號肽，切割點位于第36位和37位氨基酸之間。氨基酸序列同源性分析結(jié)果顯示該殼聚糖酶屬于GH46家族，與解淀粉芽孢桿菌ABBD菌株和MBE1283菌株所編碼的殼聚糖酶同源性最高。此外，Glu-55和Asp-71氨基酸為該殼聚糖酶的催化活性位點。
　　3、構(gòu)建谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)-殼聚糖酶融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒pGEX-5X-1-Chi，在大腸桿菌BL21中表達(dá)，利用GS