地衣芽孢桿菌β-1，3-1，4葡聚糖酶基因的克隆及其在乳酸乳球菌中的表達(dá)研究.pdf

1、β-葡聚糖酶的消化作用可促使飼料中β-葡聚糖的降解,從而在一定程度上消除其抗?fàn)I養(yǎng)作用,提高飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的利用率。β-葡聚糖酶作為添加劑和對(duì)青貯飼料處理的研究及應(yīng)用發(fā)展很快,范圍也越來(lái)越廣。經(jīng)過(guò)大量實(shí)際應(yīng)用,已普遍為飼料界所接受。目前在飼料工業(yè)中使用的酶制劑基本上是由大腸桿菌等微生物發(fā)酵產(chǎn)生的,發(fā)酵結(jié)束后需要將含酶發(fā)酵液經(jīng)過(guò)一系列后處理操作,分離,加工成干物質(zhì)才能應(yīng)用于飼料生產(chǎn)中。這樣工序繁雜,費(fèi)時(shí)費(fèi)力。若將β-葡聚糖酶在一個(gè)食品級(jí)宿主

2、菌例如乳酸菌中進(jìn)行表達(dá),則不需進(jìn)行酶制劑的發(fā)酵生產(chǎn)、分離和添加過(guò)程即可直接加入飼料中。 本實(shí)驗(yàn)首先利用PCR方法從地衣芽孢桿菌中克隆到β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因并測(cè)序,將該基因序列與其他地衣芽孢桿菌β-葡聚糖酶進(jìn)行blast比對(duì),分析其相互間的同源性。再將該基因與大腸桿菌表達(dá)載體pET32a進(jìn)行連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,得到了有效的表達(dá)。確定β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因產(chǎn)物具有生物活性后,構(gòu)建乳酸乳球菌表達(dá)載體pMG