解淀粉芽胞桿菌X030抑菌與抗腫瘤活性研究.pdf

1、芽胞桿菌分布廣泛，易分離培養(yǎng)，生長周期短，繁殖速度快，在生長繁殖過程中產(chǎn)生的活性物具有抑菌、殺蟲和抗腫瘤等生物功能。從全國各地采集的72份土樣中篩選出339株芽胞桿菌，經(jīng)抑菌與抗腫瘤活性檢測，結(jié)合形態(tài)觀察、生理生化特征和16S rRNA基因Blast同源序列比對分析，確定了一株高毒力解淀粉芽胞桿菌新菌株，命名為Bacillus amyloliquefaciens X030，簡稱BaX030（保藏號為CCTCC NO:M2014159）;

2、通過多步分離純化得到抑菌活性多肽和抗腫瘤活性小分子。
　　BaX030發(fā)酵培養(yǎng)48 h，收集上清液，經(jīng)蛋白純化(AKTA Purifier10)分離，超高效液相色譜(Agilent1290 Infinity)分析，高效液相色譜(Agilent1260 Infinity)制備，得到純的抑菌組分B2和抗腫瘤活性物BAH1，LC-MS/MS鑒定結(jié)果顯示B2分子量大小為182.09Da，BAH1分子量大小為122.14 Da。
　　

3、經(jīng)不同溫度和pH處理上清液，用濾紙片法對金黃色葡萄球菌與白色念珠菌等七種病菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn);對峙培養(yǎng)法對辣椒尖胞炭疽病菌與枇杷炭疽病菌等六種植物病原真菌進(jìn)行拮抗實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示:上清液對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌及辣椒尖胞炭疽病菌、枇杷炭疽病菌等具有較好的抑制效果;且抑菌活性在常溫、強(qiáng)酸和中性條件下最好，高溫與強(qiáng)堿處理活性降低;BaX030與辣椒尖胞炭疽病菌對峙培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，隨著培養(yǎng)時間推移孢子出現(xiàn)變黑、變小、變少、內(nèi)含物釋放和裂解現(xiàn)象;與植物

4、病原菌對峙培養(yǎng)十天，形成環(huán)狀包圍圈，辣椒尖胞炭疽病菌與枇杷炭疽病菌菌絲變黑基本停止生長。
　　BAH1（8μg/mL）分別作用于小鼠黑色素瘤細(xì)胞(B16)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人肝癌細(xì)胞(Hep-3B)和人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)。MTT數(shù)據(jù)顯示，三種腫瘤細(xì)胞增殖受到明顯抑制，且具有濃度依賴性，對HUVEC細(xì)胞增殖影響相對腫瘤細(xì)胞較小。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài);同時用Hochest33342、tubulin AlexaF