解淀粉芽胞桿菌X030抑菌與抗腫瘤活性研究.pdf

1、芽胞桿菌分布廣泛，易分離培養(yǎng)，生長周期短，繁殖速度快，在生長繁殖過程中產(chǎn)生的活性物具有抑菌、殺蟲和抗腫瘤等生物功能。從全國各地采集的72份土樣中篩選出339株芽胞桿菌，經(jīng)抑菌與抗腫瘤活性檢測，結(jié)合形態(tài)觀察、生理生化特征和16S rRNA基因Blast同源序列比對分析，確定了一株高毒力解淀粉芽胞桿菌新菌株，命名為Bacillus amyloliquefaciens X030，簡稱BaX030（保藏號為CCTCC NO:M2014159）;

2、通過多步分離純化得到抑菌活性多肽和抗腫瘤活性小分子。
　　BaX030發(fā)酵培養(yǎng)48 h，收集上清液，經(jīng)蛋白純化(AKTA Purifier10)分離，超高效液相色譜(Agilent1290 Infinity)分析，高效液相色譜(Agilent1260 Infinity)制備，得到純的抑菌組分B2和抗腫瘤活性物BAH1，LC-MS/MS鑒定結(jié)果顯示B2分子量大小為182.09Da，BAH1分子量大小為122.14 Da。
　　

3、經(jīng)不同溫度和pH處理上清液，用濾紙片法對金黃色葡萄球菌與白色念珠菌等七種病菌進行抑菌實驗;對峙培養(yǎng)法對辣椒尖胞炭疽病菌與枇杷炭疽病菌等六種植物病原真菌進行拮抗實驗，結(jié)果顯示:上清液對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌及辣椒尖胞炭疽病菌、枇杷炭疽病菌等具有較好的抑制效果;且抑菌活性在常溫、強酸和中性條件下最好，高溫與強堿處理活性降低;BaX030與辣椒尖胞炭疽病菌對峙培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，隨著培養(yǎng)時間推移孢子出現(xiàn)變黑、變小、變少、內(nèi)含物釋放和裂解現(xiàn)象;與植物

4、病原菌對峙培養(yǎng)十天，形成環(huán)狀包圍圈，辣椒尖胞炭疽病菌與枇杷炭疽病菌菌絲變黑基本停止生長。
　　BAH1（8μg/mL）分別作用于小鼠黑色素瘤細胞(B16)、人宮頸癌細胞(Hela)、人肝癌細胞(Hep-3B)和人臍帶靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)。MTT數(shù)據(jù)顯示，三種腫瘤細胞增殖受到明顯抑制，且具有濃度依賴性，對HUVEC細胞增殖影響相對腫瘤細胞較小。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài);同時用Hochest33342、tubulin AlexaF