大麗輪枝菌一個分泌系統(tǒng)蛋白P-type ATPase基因的功能驗證.pdf

1、大麗輪枝菌(Verticillium dahliae)是引起棉花黃萎病（Verticilliumwilt）的致病菌，其防治難度極大，目前尚無有效防治該病害的手段。已有研究證實大麗輪枝菌分泌的毒蛋白是引起棉花黃萎、落葉、植株死亡和減產(chǎn)的主要因素。但是黃萎病中具有諸多種類的分泌毒性蛋白，較難找到單一種類的分泌毒性蛋白作為有效的防治突破點。
　　現(xiàn)有研究表明分泌系統(tǒng)蛋白可調(diào)控諸多蛋白的分泌，據(jù)此可以從分泌系統(tǒng)蛋白的角度另辟蹊徑，找到新的

2、防治黃萎病的生物學(xué)靶點。本研究對棉花黃萎病菌中的分泌系統(tǒng)蛋白P型ATP酶(P-type ATPase，VdATPase，蛋白編號為VDAG_01765)的編碼基因的功能進行了分析。利用基因敲除技術(shù)構(gòu)建了VdATPase基因缺失的大麗輪枝菌突變體?VdATPase菌株。對突變體?VdATPase菌株的生長速率、產(chǎn)孢量進行測試，并研究其分泌蛋白產(chǎn)物對棉株葉片的侵染力及菌株對棉株致病性的影響。結(jié)果顯示，突變體菌株?VdATPase的產(chǎn)孢量和在

3、 PDA完全培養(yǎng)基上的生長速率與野生型菌株相近，而在以果膠或纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基上，突變體菌株?VdATPase的生長速率明顯低于野生型菌株；分泌蛋白的產(chǎn)量明顯減少，對棉花葉片的毒性明顯下降；野生型菌株對棉花植株造成的的病情指數(shù)為56.7±4.9，而致病菌?VdATPase對棉株造成的致病指數(shù)只有27.5±3.6，突變體菌株的致病性明顯減弱。雖然VdATPase基因的缺失對大麗輪枝菌的產(chǎn)孢量及生長速率沒有明顯的影響，但對大麗輪枝菌