染料木黃酮在小細胞肺癌H446細胞中通過抑制FoxM1通路發(fā)揮抗腫瘤作用.pdf

1、第一部分:染料木黃酮對小細胞肺癌H446細胞生長與遷移能力的影響
　　 目的:小細胞肺癌約占新診斷肺癌總數(shù)的15％-20％，其惡性程度高，增值快，生長迅速，轉移早，5年生存率低，迫切需要新的治療手段和靶點。染料木黃酮(genistein)是最重要的大豆異黃酮之一，對多種腫瘤有預防及治療作用，然而它在小細胞肺癌中的作用尚不清楚。本實驗旨在研究genistein在小細胞肺癌H446細胞中對細胞生長和遷移能力的影響，以明確genist

2、ein在小細胞肺癌中的抗腫瘤作用。
　　 方法:利用不同濃度的genistein處理H446細胞，采用CCK-8法檢測genistein對H446細胞增殖能力的影響，流式細胞術分析genistein對H446細胞凋亡及細胞周期的影響，應用劃痕實驗檢測細胞遷移能力的改變。
　　 結果:H446細胞經(jīng)不同濃度（0、10、25、50、75、100μmol/L）的genistein分別作用24、48、72h后，CCK-8法檢測細

3、胞增殖能力，結果顯示細胞增殖受到明顯抑制，且隨著genistein濃度的升高及培養(yǎng)時間的延長，細胞增殖抑制愈明顯;流式細胞術檢測經(jīng)不同濃度genistein處理后，H446細胞凋亡率的變化，結果發(fā)現(xiàn)經(jīng)genistein作用72h后，細胞凋亡率隨genistein濃度升高逐漸上升，DMSO對照組、25μmol/L、50μmol/L及75μmol/L組的凋亡率分別為4.8％±0.8％、12.5％±2．0％、44.5％±3.7％和54.9％±

4、2.9％(P＜0.05);流式細胞術檢測細胞周期變化，發(fā)現(xiàn)H446的G2/M期細胞比例由對照組的21.9％±3.3％增加至40.4％±1.6％(25μM)、61.9％±2.7％(50μM)、72.9％±4.3％（75μM），而G1及S期細胞數(shù)逐漸降低，細胞阻滯于G2/M期(P＜0.05)，即genistein可誘導H446細胞發(fā)生G2/M期細胞周期阻滯，細胞增殖受抑;劃痕實驗顯示經(jīng)genistein處理48h后，H446細胞劃痕修復速率

5、明顯下降，說明genistein可明顯抑制H446細胞的遷移能力。
　　 結論:Genistein引起H446細胞發(fā)生與藥物濃度相關的增殖抑制、凋亡增加、G2/M期細胞周期阻滯和細胞遷移能力下降，有可能成為新的有效的抗小細胞肺癌藥物。
　　 第二部分Genistein在小細胞肺癌H446細胞中發(fā)揮抗腫瘤作用的分子機制
　　 目的:探討genistein在小細胞肺癌H446中發(fā)揮抗腫瘤作用的分子機制。
　　

6、 方法:Westernblot及Real-timePCR檢測經(jīng)genistein處理后H446細胞中FoxM1基因及其下游靶基因表達的變化;FoxM1表達質粒轉染H446細胞，采用CCK-8法檢測FoxM1過表達前后，genistein抑制細胞增殖能力的變化。
　　 結果:經(jīng)genistein作用72h后，Real-timePCR實驗檢測H446細胞中FoxM1靶基因cyclinB1、cdc25B、survivin、p21表達情

7、況，結果顯示隨genistein濃度升高，cyclinB、cdc25B、survivin表達逐漸下降，p21表達逐漸增加;Westernblot實驗進一步證實FoxM1及其靶蛋白cyclinB1出現(xiàn)與genistein濃度相關的表達下降、p21表達增加。上述結果顯示genistein可抑制FoxM1信號通路活性;該研究利用FoxM1cDNA轉染H446細胞以促進FoxM1過表達，結果發(fā)現(xiàn)FoxM1表達上調后，genistein對H446