IL-7聯(lián)合IL-2對臍血CD4+CD25-T細胞體外誘導(dǎo)擴增影響的研究.pdf

1、背景:目前世界上常見的自身免疫性疾病有類風濕性關(guān)節(jié)炎、甲狀腺炎、白癜風、惡性貧血、Ⅰ型糖尿病和全身性紅斑狼瘡等,且都與體內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性 T細胞的數(shù)量密切相關(guān),研究證實疾病活動度越高的患者,其體內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)量越低。因此,將CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞應(yīng)用于自身免疫性疾病的過繼免疫治療具有十分重要的意義,但由于CD4+CD25+Tregs在體內(nèi)增殖活性低下,其存在比例和絕對數(shù)量極低,且誘導(dǎo)產(chǎn)生的CD4+C

2、D25+調(diào)節(jié)性T細胞中Foxp3表達不穩(wěn)定,使CD4+CD25+調(diào)節(jié)性 T細胞的來源問題成為了自身免疫性疾病治療的瓶頸,從而限制了 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的臨床應(yīng)用。因此,本研究致力于建立一種體外誘導(dǎo)CD4+CD25-T細胞向CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞轉(zhuǎn)化的培養(yǎng)體系,為CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　方法:采用免疫磁珠分選法分選出臍血CD4+CD25-T細胞和CD4+CD25+T細胞;加入不同濃

3、度的細胞因子IL-7結(jié)合適當濃度的IL-2作為誘導(dǎo)劑,分析IL-7體外誘導(dǎo)CD4+CD25-T細胞增殖的有效性及最適濃度。我們利用流式細胞術(shù)檢測體外擴增后的CD4+CD25-T細胞表型變化;MTS法檢測體外誘導(dǎo)擴增的CD4+CD25+Tregs及自然分選的CD4+CD25+Tregs分別對成人外周血中單個核細胞臍血CIK增殖的抑制作用;RT-PCR方法分析體外誘導(dǎo)擴增的CD4+CD25+Tregs及自然分選的CD4+CD25+Tregs

4、 FOXP3基因、IL-10基因和TGF-β基因的cDNA表達的變化。
　　結(jié)果:經(jīng)3周體外培養(yǎng)、各組細胞均有明顯的擴增。IL-7誘導(dǎo)組的擴增最強。體外抑制試驗顯示體外擴增的Tregs對成人外周血中單個核細胞和臍血CIK有明顯的抑制作用,IL-7聯(lián)合 IL-2誘導(dǎo) CD4+CD25-T細胞生成的CD4+CD25+Tregs具有較自然分選的CD4+CD25+Tregs稍弱的免疫抑制功能,其中IL-7濃度為4ng/ml,IL-2濃度為