gm-csf對(duì)臍血cd34^＋巨核祖細(xì)胞體外擴(kuò)增及分化的影響

1、中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志 J o u r n a lo f E x p e r i m e n t a lH e m a t o l o g y2 0 0 5 ；1 3 ( 6 ) ： 1 0 4 1 —1 0 4 3文章編號(hào) ( Ar t i c l eI D) ： 1 0 0 9— 2 1 3 7 ( 2 0 0 5 ) 0 6—1 0 4 1 — 0 3GM． C S F對(duì) 臍 血 C D3 4 +巨核 祖 細(xì)胞 體 外 擴(kuò)增 及 分

2、化 的影 響 陳舒 ， 朱發(fā) 明， 何 吉， 劉晉輝 ， 秦 斐， 嚴(yán)力行 浙江 省血 液 中心輸 血研 究所 ， 杭 州 3 1 0 0 0 6· 論 著 ·摘要 本實(shí)驗(yàn) 旨在研 究 G M— C S F對(duì)臍血 C D3 4細(xì)胞誘 導(dǎo)分化 為 巨核 細(xì)胞 的影 響。采 用免疫磁珠 法分選 C D 3 4細(xì)胞 ． 在含 有 T P O+I L 一 3+S C F并添加 了不同濃度( 5 、 2 0 、 1 0 0r

3、 i g ／ m1 ) 的 G M— C S F的無(wú)血清培 養(yǎng)基 中進(jìn)行培 養(yǎng)。培 養(yǎng) 6 、 l 0 、 l 4天后計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞( MN C ) ， 檢測(cè) C D 4 l + 細(xì)胞 比例 和 C F U — MK結(jié)果表 明， 培 養(yǎng) l 4天后 3種不 同濃 度 G M— C S F對(duì) MN C均有明顯的擴(kuò)增 作 用． 其 中以 2 0和 1 0 0r i g ／ mlG M— C S F的擴(kuò) 增 效果較 好。3種 不 同濃度 的

4、G M— C S F均使 C D 4 l細(xì)胞 比例增加 ， 2 0和 l 0 0r i g ／ ml 與 5r i g ／ mlG M— C S F相 比更能提 高 C D 4 1細(xì)胞的 比例 。5和 2 0r i g ／ ml 的 G M— C S F能促進(jìn) C F U— MK的形成， 但 l 0 0r i g ／ ml 的 G M— C S F卻抑制 c F U — MK的形成。結(jié)論 ： 在 T P O+I L 一 3+ S C F

5、細(xì) 胞因子組合 中添加 GM— CS F有利于促 進(jìn)臍血 C D 3 4細(xì)胞誘 導(dǎo)分化 為 巨核 細(xì)胞 。關(guān) 鍵 詞 G M— CS F； 臍 血 ； C D 3 4細(xì) 胞 ； 巨核 細(xì)胞 ； 體 外 擴(kuò) 增 中圖分類號(hào) R 3 2 9 ． 2 8 ； Q2 6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 AEf ie c t0 fGM ． CS F0 nEx p a n s i o na n dDi f f e r e n t i a t i o n0 fCD3

6、 4M e g a k a r y o c y t eP r o g e n i t o rCe l l sf r 0 m Co r dBl o o di nv i t r oC H E N S h u， Z HUF a — Mi n g， H Ej iL l UJ i n — Hu i ， Q I NF e iY A NL i — X i n gI n s t i t u t eo fB l o o dT r a n s f u

7、s i o n． B l o o dC e n t e roZ h e j i a n g． P r o v i n c e ． Ha n g z h o u31 0 0 0 6 ． C h i n aAb s t r a c tT os t u d yt h ee fe c to fGM— CS Fo nnv i t r oe x p a n s i o no fme g a k a r y o c y t ep r o g e n

8、i t o rc e l l sf r o m c o r db l o o d．C [ ) 3 4c e l l si s o l a t e db yma g n e t i cc e l ls o r t i n gs y s t e m( MA C S )we r ec u l t u r e di ns e r u m— f r e em e d i u m c o n t a i n i n gT P O． I L 一3

9、 ， S C Fa n dwi t ho rwi t h o u tv a r i o u sc o n c e n t r a t i o n so fG M — C S F ( 5 ． 2 0 ． 1O H Dr i g ／ m1 ) ．T h en u mb e r so fMN C． p r o p o r t i o no fCD3 4CD 4lc e l l sa n dCF U— M K we r em e a s u

10、r e da t6． 10a n d1 4d a y s ． T h er e s u l t ss h o we dt h a tt h ee x p a n s i o no fM NCa n dp r o p o r ti o no fCD4Ic e l l swa sa c c e l e r a t e dd i s t i n c t l yb yv a r i o u sc o n c e n t r a t i o n

11、so fGM — CS Fa f t e r1 4d a y s ．wh i l e2 0a n dl 0 0r i g ／ m lGM — CS Fe x h i b i t e dh i g h e re x p a n s i o ne f f e c tt h a nt h a to f 5 r i g ／ m 1 ．TP O +I L一 3 + S CFwi t h 5nm lo r2 0r i g ／ mlGM— C S

12、Fc o u l ds t i mu l a t et h ef o r ma t i o no fC F U— MK． w h i l eT P 0 +I L 一 3+S CFw i t h1 O H Dr i g ／ mlG M— C S Fc o u l di n —h i b i ti t ．I ti sc o n c l u d e dt h a tG M — CS Fc a na c c e l e r a t et hee

13、 x p a n s i o no fm e g a k a r y o c y t ep r o g e n i t o rc e l l sf ro m CD3 4c e l l si nc o r db l o o di nt h es e r um— f re eme d i u m c o n t a i n i n gT P 0 +I L一 3+S CF ．Ke ywo r d sGM — CS F；c o r db l

14、 o o d ；CD 3 4c e l l ：me g a k a r y o c y t e ：e x p a n s i o ni nv i t r oJE x pHe ma t o l2 0 0 5：1 3( 6) ： 1 0 41—1 0 4 3接受高劑量放療 、 化療和造血干細(xì)胞移植后 ， 病 人常會(huì)患血小板缺乏癥 。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn) ， 體外 擴(kuò)增的巨核細(xì)胞輸注到病人體 內(nèi)后 ， 能在體 內(nèi)進(jìn)一 步發(fā)育 形成 血小 板 ， 因

15、此可 加速病 人 血小板 的恢 復(fù) ，縮短 血小板 缺乏 期 。 大量 研 究 證 實(shí) ， 臍 血 巨核 系 祖細(xì)胞定向擴(kuò)增是可行 的， 且效果 明顯優(yōu)于骨髓及 外周造 血 干 細(xì) 胞 。 已知 有 多 種 因 子 調(diào) 節(jié) 巨 核 細(xì) 胞的生成和成熟 ， 但選擇不同的細(xì)胞因子組合 、 不同的培養(yǎng)條件都將影響擴(kuò)增效能。本研究觀察了在含 T P O 、 I L 一 3 、 S C F的無(wú)血 清培養(yǎng) 基 中添 加不 同濃 度 G M— C S

16、 F對(duì)臍 血 C D 3 4巨核 系祖 細(xì) 胞 定 向 誘 導(dǎo) 成 熟的影響。材料和方 法 臍 血 干細(xì)胞 采集 和分 離 選取正常分娩 的健康產(chǎn)婦 6名 ， 足月順產(chǎn)的胎兒娩 出后 ， 立即斷臍 ， 消毒臍帶表面 ， 行臍靜脈穿刺 ， 用臍 血收集袋 ( A C D — B三聯(lián) 袋， 上海血 液 中心 ) 收集臍 血。按照兩步離心方法 獲得臍血造血干細(xì)胞 ， 采 用 F i c o l l 溶液分離收集單個(gè)核細(xì)胞 ， 最終調(diào)整細(xì)胞 基

17、金項(xiàng) 目： 浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生優(yōu)秀青年科技人才專項(xiàng)基金資助項(xiàng) 目， 編 號(hào) 2 0 0 2 QN 0 0 5 )通 訊作 者 ： 嚴(yán) 力 行， 教 授 、 主 任技 師 、 研 究 生 導(dǎo) 師． 電話 ( 0 5 7 1 )8 51 6 7 81 6．E— ma i l ：z f r n O 0@ h o t m a il ． t om 2 0 0 4— 1 2— 1 3收稿 ； 2 0 0 5 — 1 0— 1 8接受 維普資訊 http

18、://www.cqvip.com G MC S F十 皿 C D 3 d跑 尋 如胞 日一 ·贏 Fi g ur eIAnal y s i sofor es am pl ebe f o r e an d a f t e rc u l t u r e4Ⅲ ± fc k Ph ?o fc c t t ~c ul[ t I r ~ b ： ； l l ml y s i ~ ‘[ h en，p ? ( 1rI l

19、t l _ [ ef~ t l l [ t ] r cR1f[ u Ic o l IR2： (II(J ” J ? I IR 5 ： CD3 4c 的』 馥復(fù)一： 艟 _ j 比性 蝌發(fā) 腳， S t e mS p a n晌臣系 增效 較好 ， 【此 小其 驗(yàn) 巾收f(shuō) r l 選 擇 丁 S t e mS p a n T MS F E M 厄I f l l 清培 養(yǎng)漓 變聆表 叨 ， 在 r P o+ 1 13 + S C F 細(xì)胞

20、因子 組 臺(tái)i ， 添加 G M． C S F 有 利T mC D 3 4 一 捫 J 也 { - 誘 導(dǎo)核細(xì)胞 i ' r l j ， ． 』 茈 ．『 } J 性 進(jìn) MN C 總 數(shù) 州 C D 4 I 細(xì) 忸的產(chǎn)品 H， 喪明該 合 能 使 惶 系胞加 散晌 增 挾得巫多較 成熟的 巨 核 細(xì)胞C F U -M K增州 究 I- 靛珊 低 濃度 G M — C S Fi I l _ 顯增 慢 Jr P ( ) + i

21、L - 3+ S C F誘 導(dǎo) ¨ 】胞 集落 形 成的 作用 ．{ 添1 f l nn g ／ m lG MC S F 時(shí) ， C F U — M Y 的 彤成 明顯受到抑 制． 細(xì)胞昕 形成的 巨住 細(xì) l 胞 集落 骶于塒J j { !細(xì) ． 刮筇 I 4叫． 巳鹼刪 ； 到 集落 ， m此 I — J 惟 刪， 濟(jì)加高濃 度 G ' d — C S F抑制 C F UM K 的 彤而 性進(jìn) 細(xì)盱 乜 的 行化

22、． 提小 G MC S I 一 濃度 并非 越 I地 蝦 ． 遮 ’ i蔡海波 等的報(bào) 進(jìn) 拙 茂參 考 文 獻(xiàn) Fi gu r e2C r L -m e a su r e d h yM c ga Cul t一 C討 論 ： 山 過(guò)體 外 擴(kuò) 增能藏 甜足罅數(shù) 攤 胞是： } 苷 巨性細(xì)胞鷹 川 m 球I關(guān)健n ¨ 題之 文 獻(xiàn)報(bào) 道 多 種 Ⅲ 胞日 丁都能 伴 內(nèi)外 蛹節(jié) 幔 細(xì) 胞的擴(kuò) 增 和 訃化． f 【

23、l JT P O， I L 一 3G MC S I 。 。 T P O在 體 外下 億能 促進(jìn)協(xié) 系姐『 胞的 伴 外增 而 日還 能促進(jìn) l l 核 『 ¨ 胞的戰(zhàn)熱 ． 趾臣累仆外擴(kuò) 增 醍誘 導(dǎo)成熱的 曼世 細(xì)胞匹 f r 徉 ． 奉 外 常 J l _ 的 l J J 同作細(xì)胞 因子 i l _I 1 前 J I 耍有 ： I L3 、 s (F ， V L等 G Mc s F稠 節(jié)接造血 療可的fl i j觀法 小

24、一 ． 有 州究 | ^G M-C S F{ _ 董 址圳胞 的K和 q - 化 l l 】 _ P乖蘑 作用 ， 能 1節(jié)巨恢細(xì)胞 D N AI ' ／ ! J 艇 刪， ， H 也獻(xiàn)報(bào) 道．GM— CS F“刪 1} 《 造 m沒 f i用 奉 寅驗(yàn) 采用 在 T P O+I L3十S CF細(xì) 合基 礎(chǔ) 1添加 GM- C S F．察 小同豫度 G M — C S F別腑 血 C D 3 4細(xì)胞 巨棱 系定H 游導(dǎo)戚熱 的

25、 影 u體外增常 州 昀 培養(yǎng) 液包¨血清 眨正札禱兩種． 研宄 清i l i 行陵系增值Ⅱ 4 抑 制物 ． 培養(yǎng)體 系巾 i多『 f _ 【 消的存 ^小儀抑 j巨棒系 細(xì)恤的增確 ． 而 日 限制 丁其臨床 曉 Ⅲ ．時(shí)還影響擴(kuò) 增敗果I hoHf l a u dr yIRi c eA “ 】 lC o r db [ ~ xlb c I I cr[ [ 1 a nh1 n c㈣ lf ，m I 】 r n 

26、8; Jme g a k a r y ~ c y lp lc ’t i l o r ~ e [ I sEI 【 c l ” 4I lI：2 7： ： 9 jJ l 】 IBc n 0 【 1 m FBa l t a g [ i ~M lrl 】 l jPL ' Ia lMe? v f _ Lg e a i mr ~I l n1 cc 『 1 c r H Id】I Ids a l b hd mm】iTI _ i oI n Ig

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30、 l f l l口 I - l’ Pi 1g?u l lIi l l a C ~p h?¨ 、L 刪 u l a t iz }lf r1 n t e r l c l ~ k i 13a n di n l ￡ r I e ul n6【 I npL ~ r i nR t l ?衄 a kI )c yFI 'H ~ l l U l l O lI ¨ II： 6 0 86 l27 ^t 】hIu I 、 1r iPC

31、【‘¨P LI ) e ~y pr i sE N E nl 、crc c l m b r? h u ¨ I a1t h l O l l l ~ ) p o i e t m ? cn kr0~ o X o f l vm 1 1 【 l l HI 1i n dm1 k a q l IJpt o i d > h yI ' u n TnCD3 4l1 ? ? InB rJ¨ma II 9 9 6 ‘