CD137單抗聯(lián)合IL-15體外擴(kuò)增NK細(xì)胞及其對肺癌細(xì)胞的殺傷活性.pdf

1、目的：建立CD137單抗聯(lián)合IL-15體外擴(kuò)增NK細(xì)胞的方案，研究擴(kuò)增后NK細(xì)胞對肺癌細(xì)胞的殺傷活性。
　　方法：分離健康人外周血單個核細(xì)胞，經(jīng)免疫磁珠（miniMACS）陰性分選獲取CD3-CD56+NK細(xì)胞，將NK細(xì)胞分成對照組、IL-2+CD137單抗聯(lián)合IL-15組、IL-2+CD137單抗組、IL-2+IL-15組、IL-2組進(jìn)行培養(yǎng)，每3d半量更換條件培養(yǎng)基。經(jīng)錐蟲藍(lán)染色法計(jì)算NK細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)；流式細(xì)胞術(shù)檢測NK細(xì)胞

2、的表型；LDH酶釋放法檢測NK細(xì)胞對肺癌細(xì)胞株A549的殺傷活性；ELISA法檢測擴(kuò)增后NK細(xì)胞培養(yǎng)液上清中IFN-γ的分泌量。
　　結(jié)果：經(jīng)免疫磁珠陰性分選后NK細(xì)胞純度為（93.28±3.21）%。IL-2+CD137單抗聯(lián)合IL-15組NK細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)明顯高于IL-2+CD137單抗組、IL-2+IL-15組、IL-2組及對照組[(86.20±5.00vs60.01±5.00、49.06±4.39、17.04±1.49、3.

3、95+0.23，P<0.01)]。IL-2+CD137單抗聯(lián)合IL-15組的對A549細(xì)胞的殺傷效率明顯高于其它組[(93.14±3.27)%、(83.15±4.03)%、(71.25±3.24)%、(62.27±3.01)%、(49.38±2.35)%。P<0.01]。IL-2+ CD137單抗聯(lián)合IL-15組培養(yǎng)液上清中的IFN-γ的分泌水平明顯高于IL-2+ CD137單抗組、IL-2+IL-15組、IL-2組及對照組[(296.