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文檔簡(jiǎn)介
1、柑橘是人們?nèi)粘I钪兄匾乃彩俏覈?guó)重要的經(jīng)濟(jì)樹種;但是不耐低溫成為了其分布的制約因素。枳(Poncirus trifoliata(L.) Raf.)極抗寒,主要作為柑橘種植的砧木。研究枳抗寒的機(jī)理對(duì)提高柑橘類植物的抗寒性有重要意義。PtrBAM1是枳中編碼一個(gè)β-淀粉酶的基因,其同源基因AtBAM3受低溫快速誘導(dǎo),CBF/DREB途徑是研究得比較透徹的低溫調(diào)控路徑;本研究在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)獲得的PtrBAM1和PtrCBF3轉(zhuǎn)基因煙草的
2、基礎(chǔ)上對(duì)PtrBAM1基因的抗寒功能進(jìn)行鑒定以及與CBF/DREB途徑的相互關(guān)聯(lián)進(jìn)行分析。
1.測(cè)定PtrBAM1超表達(dá)系和對(duì)照系煙草在-4℃處理2.5h下的存活率,發(fā)現(xiàn)超表達(dá)系的存活率均為70%左右,顯著高于野生型的37.8%和空載22.3%;枳4℃處理6h后β-淀粉酶活性為2.2U/mgprot高于處理前,麥芽糖含量為13.4μg/mL高于處理前;說明PtrBAM1基因確實(shí)與植物的抗寒性相關(guān),并快速響應(yīng)低溫。亞細(xì)胞分析結(jié)果
3、表明PtrBAM1基因定位于葉綠體。PtrBAM1啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測(cè)也發(fā)現(xiàn)存在多個(gè)與光合作用相關(guān)的順式作用元件;推測(cè)PtrBAM1基因通過調(diào)節(jié)光合作用來增強(qiáng)植物的抗寒性。
2.通過測(cè)定PtrCBF3轉(zhuǎn)基因系煙草的β-淀粉酶活性和麥芽糖含量,說明PtrBAM1受CBF調(diào)控;酵母單雜交和雙螢光素酶活性測(cè)定(LUC/REN)證明PtrBAM1基因是CBF的下游基因,主要是和PtrCBF3互作參與抗寒途徑,通過LUC/REN結(jié)果推
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