水稻Sp1 11互作基因的克隆與功能鑒定.pdf

1、水稻假病斑基因Spl11(spotted leaf 11)能通過泛素降解作用，負調(diào)控細胞壞死及假病斑的形成。Spl11突變體在自然條件下形成假病斑，從而提高對稻瘟病菌和白葉枯病菌的抗性。為確定參與Spl11基因調(diào)控抑制細胞死亡和防御反應過程的物質(zhì)，本研究通過酵母雙雜交體系，以SPL11為誘餌，篩選水稻cDNA文庫，獲得了8個互作蛋白SPINs：SPIN1-SPIN8。除SPIN6外，所有蛋白均與SPL11之間存在中度或強烈相互作用。BL

2、AST同源蛋白功能分析結(jié)果表明，SPIN1編碼一個含KH的RNA結(jié)合蛋白；SPIN2基因，編碼一個球蛋白重鏈；SPIN3編碼一個類MOM蛋白，可能與維持轉(zhuǎn)基因沉默有關(guān)；SPIN4編碼一個含有Rpr2/Rpp21(RPR)域的RNA P酶蛋白，SPIN1和SPIN4均與mRNA的前體剪接功能有關(guān)。SPIN5編碼一個類乙酰谷氨酸激酶蛋白；SPIN6編碼一個Rho-GTP激酶蛋白；SPIN7和SPIN8未檢索到相關(guān)功能。 本研究中我們

3、分別構(gòu)建了SPIN3、SPIN4、SPIN6基因的RNAi及超表達載體，并對功能進行了鑒定。通過遺傳轉(zhuǎn)化及PCR鑒定共獲得了多個陽性后代：SPIN3轉(zhuǎn)基因RNAi陽性后代41個株系，超表達陽性后代6個株系；SPIN4轉(zhuǎn)基因RNAi陽性后代1個株系，超表達陽性后代2個株系；SPIN6轉(zhuǎn)基因RNAi后代46個株系，超表達陽性后代9個株系。對陽性后代進行白葉枯病菌和稻瘟病菌抗性功能鑒定發(fā)現(xiàn)，RNAi株系中，僅SPIN4后代對白葉枯病菌抗性增強