甘肅甘草內(nèi)生菌有效菌種的篩選及藥效學(xué)研究.pdf

1、目的：通過對(duì)甘肅野生及栽培甘草內(nèi)生菌多樣性的研究，篩選出對(duì)金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌有抑菌作用的活性內(nèi)生菌，考察活性內(nèi)生菌的生理特性及成分，并以活性內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與宿主植物有效成分進(jìn)行小鼠肺炎藥效學(xué)對(duì)比研究，觀察甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與宿主有效成分之間的相關(guān)性，為解決甘肅野生甘草資源的匱乏和尋找甘草有效成分替代品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1、采用NA、PDA培養(yǎng)基對(duì)甘草內(nèi)生菌進(jìn)行分離和純化，通過分離頻率的比較尋找野生及栽培甘草各自的優(yōu)

2、勢(shì)菌株。
　　2、以金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌為靶標(biāo)菌，采用定性和定量?jī)煞N抑菌方法，篩選出具有抑菌效果的活性內(nèi)生菌。
　　3、通過測(cè)定活性內(nèi)生菌的生長(zhǎng)曲線、pH值范圍等等，研究活性內(nèi)生菌的生理特性。
　　4、利用HPLC法分析活性內(nèi)生菌的代謝產(chǎn)物，計(jì)算目標(biāo)成分的含量，掌握活性內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的成分分布情況。
　　5、通過肺指數(shù)、NOS含量、IL-6含量、病理切片等指標(biāo)的觀察分析，研究活性內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物對(duì)小鼠肺炎的干

3、預(yù)作用。
　　結(jié)果：1、野生及栽培甘草中共分離到132株內(nèi)生菌，其中內(nèi)生細(xì)菌119株，內(nèi)生真菌13株，優(yōu)勢(shì)菌株為JTYB-001、JTYB-026、JTYB-060、JTYF-001、JTYF-006、JTZB-001、JTZB-049、JTZF-001。
　　2、野生及栽培甘草中篩選出的菌株JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001對(duì)金黃色葡萄球菌均有抑制作用(P<0.05)，JTYB-001、JTZB-001對(duì)

4、肺炎鏈球菌也有抑制作用(P<0.05)。菌株JTYB-001和JTZB-001在MIC為2mg·ml-1的條件下能抑制金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的生長(zhǎng)，菌株JTYB-053在MIC為1mg·ml-1的條件下能抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)。
　　3、菌株JTYB-001在4～10h生長(zhǎng)速度最快，至24h仍在緩慢生長(zhǎng)。菌株JTYB-053在4～16h生長(zhǎng)速度最快，在16h達(dá)到最大值，此后進(jìn)入衰亡期。菌株JTZB-001在4～10h生長(zhǎng)速度

5、最快，至24h仍在緩慢生長(zhǎng)。
　　菌株JTYB-001、JTZB-001在pH值4-6時(shí)生長(zhǎng)旺盛，pH值6-8時(shí)生長(zhǎng)達(dá)到平衡，隨著pH值的繼續(xù)增大，其菌體生長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)。菌株JTYB-053在 pH值＜5時(shí)表現(xiàn)為弱生長(zhǎng)，在 pH值5-6之間菌體生長(zhǎng)旺盛，當(dāng)pH值6-8時(shí)，菌體生長(zhǎng)達(dá)到平衡，pH值>8時(shí)菌體生長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)。
　　4、菌株JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001的RT值與甘草酸標(biāo)準(zhǔn)品RT值接近，判斷可

6、能三種菌株的發(fā)酵液中含有甘草酸，經(jīng)面積法計(jì)算三種菌株的甘草酸含量分別為0.033mg·ml-1，0.005mg·ml-1，0.013mg·ml-1。
　　5、菌株 JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001均能降低小鼠肺指數(shù)(P<0.05)，肺組織中的NOS含量(P<0.05)和血清中的IL-6含量(P<0.05)，病理切片顯示三株菌代謝產(chǎn)物能夠減輕肺部的炎癥反應(yīng)。
　　結(jié)論：通過對(duì)甘肅甘草內(nèi)生菌的分離培養(yǎng)及多樣性