高遷移率族蛋白B1在蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣炎癥反應(yīng)中的作用及機制研究.pdf

1、目的：1、探討腫瘤壞死因子(TNF-α)與蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后腦血管痙攣(CVS)的關(guān)系。2、探討SAH后高遷移率族蛋白(HMGB1)HMGB-1誘生機制。3、探討HMGB1致血管痙攣作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。 方法： 實驗1、蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣及炎癥反應(yīng)。枕大池二次注血方法制作SAH模型，觀察基底動脈的血管形態(tài)學(xué)變化；采用免疫組化、ELISA和RT-PCR方法檢測TNF-α在SAH后基底動脈中的表達變化。

2、 實驗2、蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣時HMGB1的表達變化及其表達的調(diào)控機制研究。制作SAH模型，ELISA及RT-PCR方法觀察HMGB1在SAH后基底動脈中的表達變化；以免疫組化方法檢測基底動脈p-p38MAPK的表達情況，RT-PCR方法檢測p38MAPK的表達。制作SAH模型，注血前30分鐘預(yù)先給與SB203580，ELISA及RT-PCR檢測，觀察HMGB1在SB203580治療后基底動脈中的表達變化。 實驗3、HM

3、GB1致腦血管痙攣作用及其作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究。枕大池注入三種劑量HMGB1(三種劑量：10 ng/只、100ng/只、1000 ng/只)，H．E染色觀察基底動脈的血管形態(tài)學(xué)變化；選擇最合適HMGB1劑量制作HMGB1模型，以免疫組化、ELISA、RT-PCR方法檢測基底動脈中TNF-α的表達情況；以免疫組化方法檢測基底動脈p-p38MAPK的表達情況，Western-blot和RT-PCR方法，觀察基底動脈中p38MAPK表達變化

4、情況；制作HMGB1模型，注藥前30分鐘預(yù)先給與SB203580，觀察基底動脈的血管形態(tài)學(xué)變化，以免疫組化、ELISA和RT-PCR方法，檢測TNF-α在注藥后基底動脈中的表達變化情況。 結(jié)果： 實驗1、SAH后大鼠基底動脈出現(xiàn)痙攣，5-7天時最明顯。同時基底動脈中TNF-α陽性內(nèi)皮細胞數(shù)、TNF-α蛋白及mRNA水平增高，7天時達高峰。 實驗2、基底動脈HMGB1蛋白及mRNA水平在SAH后升高，并于7天達高峰

5、。SAH后基底動脈p-p38MAPK蛋白、p38MAPK基因表達增加，5天時達高峰。SB203580治療后大鼠基底動脈HMGB1蛋白、mRNA升高，5-7天達高峰。與未治療組相比，治療組基底動脈HMGB1蛋白、基因濃度每個時間點均降低。 實驗3、枕大池內(nèi)注入HMGB1(100ng/只)最適宜，基底動脈出現(xiàn)痙攣，5天最為明顯。基底動脈TNF-α陽性的內(nèi)皮細胞數(shù)、蛋白、mRNA表達增加，于5天時達高峰。基底動脈p-p38MAPK蛋白

6、及p38MAPK基因表達從1天時開始升高，5-7天達高峰。SB203580治療后基底動脈出現(xiàn)痙攣，但與同時相的未治療組相比，基底動脈痙攣緩解。SB203580治療組基底動脈TNF-α蛋白、mRNA水平增高并于3天時達高峰。與未治療相比，抑制p38MAPK途徑后各時間點TNF-α表達均減少。 結(jié)論： 1、SAH后基底動脈出現(xiàn)痙攣狀態(tài)，TNF-α可能導(dǎo)致SAH后CVS。 2、SAH后可能通過p38MAPK信號通路的激