乙肝病毒對(duì)于肝癌細(xì)胞DNA雙鏈斷裂損傷后修復(fù)蛋白CtIP功能的影響.pdf

1、研究背景:原發(fā)性肝癌是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,乙肝病毒(HBV)感染是導(dǎo)致其發(fā)生發(fā)展的常見(jiàn)誘因。DNA雙鏈斷裂損傷(DSBs)是導(dǎo)致腫瘤惡性發(fā)展的一個(gè)主要因素。研究顯示,HBV感染可以引起不同程度的DNA損傷,包括DSBs。抑癌蛋白CtIP在DSBs發(fā)生后再修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。關(guān)于HBV感染是否影響肝癌細(xì)胞在遭受DSBs后修復(fù)過(guò)程中抑癌蛋白CtIP蛋白的正常功能未見(jiàn)研究報(bào)道,有待于進(jìn)一步的深入研究。
　　目的:研

2、究HBV感染對(duì)肝癌細(xì)胞DSBs修復(fù)過(guò)程中抑癌蛋白CtIP表達(dá)及功能的影響。
　　方法:選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBV基因組的HepG2.2.15作為實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株,選擇經(jīng)典原發(fā)性肝癌HepG2作為對(duì)照組細(xì)胞株,分別給予低濃度抗腫瘤藥物博來(lái)霉素(BLM)處理誘導(dǎo)產(chǎn)生DSBs,利用Realtime-PCR與WesternBlot技術(shù)檢測(cè)DSBs發(fā)生后CtIP在RNA、總蛋白表達(dá)水平及磷酸化水平的改變。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(1)低濃度BLM

3、給藥24h后,DSBs金標(biāo)準(zhǔn)蛋白γ-H2AX表達(dá)顯著上升,證實(shí)BLM處理細(xì)胞株24h后DSBs發(fā)生(2)Realtime-PCR結(jié)果顯示:兩組肝癌細(xì)胞株在給藥處理后CtIPRNA表達(dá)均顯著上調(diào);實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株與對(duì)照組細(xì)胞株之間,給藥前及給藥后HepG2.2.15細(xì)胞株RNA表達(dá)均高于HepG2細(xì)胞株;P值<0.05(3)WesternBlot分別檢測(cè)給藥前及給藥后各個(gè)細(xì)胞株的CtIP總蛋白表達(dá)情況,結(jié)果顯示:同種細(xì)胞間,給藥處理后CtIP

4、總蛋白表達(dá)明顯上調(diào);實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間,給藥前及給藥后HepG2.2.15細(xì)胞株CtIP總蛋白表達(dá)量均明顯高于HepG2細(xì)胞株CtIP總蛋白表達(dá)量;P值<0.05(4)檢測(cè)給藥前和給藥后各個(gè)細(xì)胞株的絲氨酸位點(diǎn)磷酸化CtIP蛋白表達(dá)情況:給藥前各個(gè)細(xì)胞株,CtIP磷酸化蛋白基本不表達(dá);給藥處理后,各個(gè)細(xì)胞株的CtIP磷酸化蛋白均顯著上調(diào),而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株的CtIP磷酸化程度明顯低于對(duì)照組。
　　結(jié)論:肝癌細(xì)胞DNA雙鏈斷裂損傷后其關(guān)鍵