早期前房沖洗在兔角膜堿燒傷治療中的基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：
　　明確早期前房沖洗術(shù)在治療兔角膜堿燒傷的療效及其病程轉(zhuǎn)歸，觀察早期前房沖洗對(duì)堿燒傷角膜的影響及其病理變化，觀察堿燒傷角膜 IL-1β與TGF-β2表達(dá)水平、蛋白分布以及早期前房沖洗對(duì)其影響。
　　方法：
　　48只新西蘭白兔隨機(jī)分為4組。A組16只，右眼均于燒傷后2h行前房沖洗。B組16只，右眼均于燒傷后12h行前房沖洗。C組16只，右眼均于燒傷后24h行前房沖洗。D組于A、B、C三組中隨機(jī)選取左眼16只行堿

2、燒傷處理，作陰性對(duì)照組。以裂隙燈檢查法觀察角膜混濁情況、新生血管、上皮缺損等情況，活體共聚焦顯微鏡觀察角膜結(jié)構(gòu)變化；各組分別于燒傷后1、4、7、14d處死取樣，以Q-PCR檢測(cè)各組間角膜中TGF-β2以及IL-1β的含量，免疫組織化學(xué)方法觀察TGF-β2和IL-1β的來(lái)源。組織病理學(xué)方法觀察炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)、角膜結(jié)構(gòu)的病理變化。
　　結(jié)果：
　　1.所有兔眼，堿燒傷模型建模成功當(dāng)天混濁評(píng)分組間差異無(wú)顯著性（P>0.05）；A、

3、B組于第1、4、7、14d低于C、D組(P<0.05)，A組于第7、14d低于B組(P<0.05)。C組于1、4、7、14d混濁評(píng)分與D組有差異(P<0.05)
　　2.病理組織學(xué)檢查：(1)HE染色示角膜堿燒傷是以PMN為主浸潤(rùn)角膜的炎癥，可見(jiàn)角膜纖維紊亂，成纖維細(xì)胞增生。(2) A、B、C組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度、成纖維細(xì)胞數(shù)量、纖維紊亂及壞死程度較D組降低，但A組與B組無(wú)明顯差異。
　　3.免疫組化示:
　　1、IL-

4、1β：(1)堿燒傷角膜組織中IL-1β表達(dá)升高，主要表達(dá)于炎癥細(xì)胞、角膜上皮基底細(xì)胞胞質(zhì)、成纖維細(xì)胞；D組角膜IL-1β隨時(shí)間表達(dá)逐漸升高，在第4d顯著上升，第14d表達(dá)最高。(2) A組在第7d、第14d表達(dá)明顯低于對(duì)照組與C組(P<0.05)；(3)在第1d，A、B、C、D四組間角膜組織中IL-1β免疫組化評(píng)分比較差異不顯著（P>0.05），在第4、7、14d，A、B、C組表達(dá)低于D組(P<0.05)，A、B組間各時(shí)間點(diǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義（P>0.05）。
　　2、TGF-β2：(1)堿燒傷角膜組織中TGF-β2表達(dá)升高，主要表達(dá)于角膜上皮基底細(xì)胞膜、胞質(zhì)，以及基質(zhì)成纖維細(xì)胞處，在上皮增生和基質(zhì)修復(fù)處也可見(jiàn)表達(dá)。在角膜損傷區(qū)域中央上皮及基質(zhì)處表達(dá)明顯高于周邊區(qū)。對(duì)照組中，TGF-β2在第7d達(dá)到高峰，第14d有所下降。，(2)A組在第4、7、14d表達(dá)均低于其他三組(P<0.05)。B組在第4、7d表達(dá)低于C、D二組(P<0.05)。
　　4. Q-PC

6、R結(jié)果顯示：
　　1、IL-1β：(1)堿燒傷角膜組織IL-1β基因表達(dá)隨時(shí)間逐漸增加，在第4d顯著上升，在第14d達(dá)到高峰。(2)A組在第4d達(dá)到高峰，隨后逐漸下降，在各時(shí)間段表達(dá)低于D組（P＜0.05），與C組在第7d、14d有明顯差異（P＜0.05），但與B組各時(shí)間段無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　2、TGF-β2：（1）堿燒傷角膜組織TGF-β2基因表達(dá)逐漸上升，在第7d達(dá)到高峰，第14d下降；A組在各時(shí)間段均低于

7、C、D組(P<0.05)，與B組于第7、14d有明顯差異(P<0.05)。
　　5.活體共聚焦顯微鏡示：（1）堿燒傷后1d，兔角膜上皮細(xì)胞腫脹，部分區(qū)域看不到上皮細(xì)胞，淺基質(zhì)出現(xiàn)細(xì)小點(diǎn)狀的炎性細(xì)胞。（2）第4d，兔角膜上皮細(xì)胞缺失增多；淺基質(zhì)細(xì)胞邊界模糊，明顯腫脹，炎性細(xì)胞增多；內(nèi)皮細(xì)胞邊界模糊，呈多形性改變，細(xì)胞間隙增大，連接較為疏松，但未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞。（3）第7d，兔角膜上皮繼續(xù)缺失；淺基質(zhì)細(xì)胞腫脹，炎性細(xì)胞增多，偶見(jiàn)新生血

8、管內(nèi)皮，深基質(zhì)層細(xì)胞減少；內(nèi)皮細(xì)胞可見(jiàn)缺失。（4）第14d，基質(zhì)層及上皮可見(jiàn)瘢痕形成，全基質(zhì)可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞。早期沖洗組中，上皮細(xì)胞缺失較少，內(nèi)皮細(xì)胞始終未見(jiàn)明顯缺失，基質(zhì)炎性細(xì)胞較對(duì)照組明顯較少。
　　結(jié)論：
　　1.早期前房沖洗可降低堿燒傷角膜的潰瘍?cè)u(píng)分和炎癥壞死程度，有助于上皮修復(fù)，減少瘢痕形成。
　　2.早期前房沖洗可能降低堿燒傷角膜組織中的IL-1β表達(dá)水平，從而減輕炎癥反應(yīng)，抑制潰瘍形成。
　　3.角