吡非尼酮在大鼠角膜堿燒傷后瘢痕形成中的實驗研究.pdf

1、目的：
　　通過吡非尼酮對大鼠角膜堿燒傷模型的實驗研究，評估抗纖維化藥物吡非尼酮在大鼠角膜堿燒傷后角膜上皮修復及瘢痕形成中的作用。
　　方法：
　　隨機選取健康的2月齡Wistar大鼠30只，雌雄不限，體質量200-300g，隨機選擇6只作為正常對照組，24只大鼠于右眼制作堿燒傷模型，堿燒傷模型制作成功后隨機分為A、B兩組，每組12只。堿燒傷后，實驗組即A組予以5g/L的吡非尼酮滴眼液，對照組B組予以磷酸鹽緩沖液（PB

2、S），每組右眼行滴眼液治療，均每天滴6次連續(xù)14天。各組分別在應用滴眼液治療后的第1天、第4天、第7天、第14天，在裂隙燈下觀察角膜損傷面積、角膜混濁情況，并于第7天及第14天分別處死6只大鼠，取下右眼角膜。通過角膜組織的HE染色觀察各組結構的差異，免疫組化檢測CollagenIV、α-SMA、VEGF、CD34的表達情況，利用蛋白質免疫印跡檢測α-SMA、VEGF、PEDF、CD31、CD34、NF-κB的表達情況。
　　結果：

3、
　　1、通過對大鼠角膜缺損面積和角膜混濁情況的觀察，結果顯示：在大鼠角膜缺損面積的比較中實驗組與對照組在堿燒傷后第7天，差異明顯，具有統(tǒng)計學意義。角膜混濁評分比較在第7天和第14天差異顯著，P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。
　　2、通過對吡非尼酮實驗組和PBS對照組大鼠角膜組織的HE染色，結果顯示：在堿燒傷后第7天及第14天，PBS對照組角膜組織中見大量炎性細胞，而吡非尼酮實驗組中同樣也有炎性細胞形成，但數(shù)量明顯較對照組少

4、。
　　3、通過對實驗組和對照組大鼠角膜組織的免疫熒光染色，結果顯示：正常角膜組織中無α-SMA及CD34表達。VEGF在正常角膜組織中極低表達，CollagenIV表達于正常角膜基質層。堿燒傷后CollagenIV、α-SMA、VEGF、CD34均有明顯表達，CollagenIV、α-SMA在第7天及第14天吡非尼酮實驗組的表達量均明顯低于對照組，累積光密度值（IOD）比較具有統(tǒng)計學差異，P<0.05，VEGF、CD34則在第1

5、4天差異最為顯著。
　　4、蛋白質免疫印跡結果顯示：吡非尼酮實驗組在堿燒傷后PEDF的表達較高并維持在一定的水平，α-SMA、CD31、CD34、VEGF表達量均低于PBS對照組，且具有一定的差異。但NF-κB的表達兩組未見明顯差異。
　　結論：
　　1、吡非尼酮通過下調堿燒傷后大鼠角膜組織中CollagenIV、α-SMA的表達，抑制角膜瘢痕形成。
　　2、吡非尼酮能抑制堿燒傷后大鼠角膜中VEGF的表達，促進P