載rhBMP-2-PLA緩釋微球的生物支架結(jié)合自體松質(zhì)骨修復(fù)骨缺損的研究.pdf

1、目的:研究重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)/聚乳酸（polylactic acid,PLA)緩釋微球的理化特性及與兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow stem cells,BMSCs)的相容性；建立兔橈骨缺損模型，探討含rhBMP-2/PLA緩釋微球的絲素蛋白（silk fibroin，SF）/殼聚糖（chitosan，CS）/

2、納米羥基磷灰石（nano Hydroxyapatite，n-HA)生物支架結(jié)合自體松質(zhì)骨修復(fù)其橈骨缺損的療效。
　　方法：1、采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備rhBMP-2/PLA緩釋微球，進(jìn)行掃描電鏡、激光粒度檢測及采用ELISA試劑盒檢測包封率、載藥率及體外釋藥率。
　　2、采用全骨髓貼壁篩選法分離兔 BMSCs，并與 rhBMP-2/PLA緩釋微球共培養(yǎng)，采用MTT法、倒置顯微鏡及掃描電鏡觀察等評(píng)價(jià)微球的細(xì)胞相容性。
　　

3、3、取新西蘭大白兔75只，隨機(jī)分成5組構(gòu)建右橈骨骨缺損模型：A組植入含rhBMP-2/PLA緩釋微球的SF/CS/n-HA生物支架結(jié)合部分自體松質(zhì)骨，B組植入含rhBMP-2的SF/CS/n-HA生物支架結(jié)合部分自體松質(zhì)骨，C組植入自體松質(zhì)骨，D組植入SF/CS/n-HA生物支架，E組不植入任何材料。分別于術(shù)后4、8、12周取材進(jìn)行大體觀察、X線攝片及組織學(xué)、生物力學(xué)檢查并參照Lane-Sandhu骨缺損修復(fù)組織X線和組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行

4、評(píng)分評(píng)估骨缺損修復(fù)療效。
　　結(jié)果：1、掃描電鏡見rhBMP-2/PLA緩釋微球近似圓形，形態(tài)較規(guī)則，分散性較好，表面光滑。平均粒徑839.6nm，包封率及載藥率分別為88.943％±2.878%、0.026%±0.001%；微球在第1天釋藥約10.199%，隨后釋藥較恒定，至第19天累計(jì)釋藥率為54.643%。
　　2、MTT法檢測rhBMP-2/PLA緩釋微球?qū)?xì)胞毒性結(jié)果分析顯示：rhBMP-2/PLA緩釋微球?qū)?xì)胞無

5、毒性；隨著時(shí)間增加，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增長數(shù)量明顯多于對(duì)照組，第1、3天實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組OD值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），第5、7天實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組OD值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05)。倒置顯微鏡觀察及掃描電鏡觀察細(xì)胞生長良好，增殖分裂正常。
　　3、術(shù)后4、8、12周大體觀、X線、組織學(xué)、生物力學(xué)、Lane-Sandhu骨缺損修復(fù)組織X線和組織學(xué)評(píng)分發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的延長，A組與C組修復(fù)療效相當(dāng)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，優(yōu)

6、于其他各組，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：1、制備出的rhBMP-2/PLA緩釋微球的粒徑達(dá)到中華人民共和國藥典第10版二部關(guān)于亞微球的定義標(biāo)準(zhǔn)及包封率不低于80%的要求并且在體外具有很好的緩釋功能。
　　2、rhBMP-2/PLA緩釋微球?qū)MSCs具有良好的細(xì)胞相容性。
　　3、含rhBMP-2/PLA緩釋微球的SF/CS/n-HA生物支架結(jié)合部分自體松質(zhì)骨修復(fù)骨缺損的療效與完全使用自體松質(zhì)骨修