絲素蛋白-松質(zhì)骨雙相支架負(fù)載異體BMSCs修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)骨軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：分離、擴(kuò)增兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞，并體外構(gòu)建絲素蛋白—異體松質(zhì)骨不同孔徑的雙相支架。將負(fù)載異體BMSCs的雙相復(fù)合支架植入兔膝關(guān)節(jié)骨軟骨缺損，觀察軟骨修復(fù)能力。觀察絲素蛋白在軟骨組織工程中的應(yīng)用前景，并探討同種異體BMSCs移植修復(fù)骨軟骨缺損的可行性。 方法： 1．利用密度梯度離心法（1．073g/ml，Percoll）分離擴(kuò)增兔BMSCs，并觀察其在體外培養(yǎng)條件下的增殖情況。以BrdU標(biāo)記BMSCs，測(cè)定細(xì)胞標(biāo)記率，并探

2、討B(tài)rdu對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用。 2．將BrdU標(biāo)記的BMSCs與絲素蛋白—松質(zhì)骨雙相支架復(fù)合培養(yǎng)，體外構(gòu)建組織工程化軟骨，并掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架上的粘附增殖情況。 3．將體外構(gòu)建的組織工程化軟骨植入兔膝關(guān)節(jié)，修復(fù)股骨髕骨溝骨軟骨缺損。 4．分別在術(shù)后2、4、12周取材，大體觀察骨軟骨缺損修復(fù)情況，并利用HE、甲苯胺藍(lán)染色及Ⅱ型膠原組化觀察骨軟骨修復(fù)情況。Brdu免疫組化示蹤同種異體BMSCs的遷移、增殖和分化

3、。 5．以Wakitani組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)半定量測(cè)定軟骨組織修復(fù)。 結(jié)果： 1．兔BMSCs在體外易于分離擴(kuò)增和純化，擴(kuò)增3代的BMSCs細(xì)胞仍保持較強(qiáng)的增殖能力。10μmol/L濃度的Brdu對(duì)BMSCs的增殖沒有明顯的抑制作用，并較好的實(shí)現(xiàn)了對(duì)BMSCs細(xì)胞的標(biāo)記（Mean±SD，81．89±2．005）。 2．BMSCs能在絲素蛋白和松質(zhì)骨支架上較好的粘附、生長(zhǎng)，共培養(yǎng)后成功的構(gòu)建了組織工程化軟骨。

4、 3．術(shù)后2、4、12周取材可見到Brdu標(biāo)記的異體BMSCs的存活 4．實(shí)驗(yàn)組（BMSCs—絲素蛋白—松質(zhì)骨復(fù)合體植入組）在兔體內(nèi)生成透明軟骨樣組織并修復(fù)了骨軟骨缺損，其Wakitani組織學(xué)評(píng)分與空白組和單純支架組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。自體骨軟骨移植較好的保持了正常軟骨的形態(tài)。其組織學(xué)評(píng)分與其他三組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1．應(yīng)用密度梯度離心法可以高效的實(shí)現(xiàn)對(duì)BMSCs分離和純化。10μmol/l濃度的Br