骨髓基質(zhì)細(xì)胞-脫細(xì)胞骨基質(zhì)-bFGF復(fù)合體修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的：應(yīng)用軟骨組織工程技術(shù)，體外分離培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stem cells，BMSCs)作為種子細(xì)胞，并與兔同種異體脫細(xì)胞骨基質(zhì)(Acller bone matrix，ACBM)支架材料復(fù)合，造成兔膝關(guān)節(jié)5mm×5mm×3mm關(guān)節(jié)軟骨缺損，植入BMSCs-ACBM復(fù)合體，觀察其對關(guān)節(jié)軟骨缺損的修復(fù)作用；并關(guān)節(jié)內(nèi)應(yīng)用堿性成纖維生長因子(basic fi-broblast growth factor，bFGF)緩釋

2、微球，觀察bFGF對BMSCs-ACBM復(fù)合體修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的強化作用。期望能夠找到理想的修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的方法。方法：①MSCs細(xì)胞分離、培養(yǎng)：取2月齡健康兔3只，無菌穿刺抽取骼骨骨髓4-6ml，應(yīng)用Percoll分離法分離獲得BMSCs，進行原代、傳代細(xì)胞培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和生長狀況。②ACBM的制備：按照Urist方法制備ACBM。將健康四月齡新西蘭白兔麻醉后處死，取椎體松質(zhì)骨，存放在-80℃冰柜中凍存72h，仔細(xì)剔除

3、附著軟組織，置于脫鈣液中脫鈣；脫脂；以無菌蒸餾水反復(fù)沖洗、浸泡。取出后自然晾干，剪成5mm×5mm×3mm的圓柱體狀，環(huán)氧乙烷消毒。③取培養(yǎng)第二代BMSCs，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106/ml，接種到ACBM上，復(fù)合培養(yǎng)7天，電鏡觀察BMSCs在ACBM內(nèi)生長增殖情況。④取4月齡健康新西蘭白兔36只，雙側(cè)股骨滑車處鉆直徑5mm，深度3mm的關(guān)節(jié)軟骨缺損，深達髓腔。隨機分為3組，每組12只：A組，實驗組，雙膝軟骨缺損處植入BMSCs+ACBM

4、，并關(guān)節(jié)內(nèi)應(yīng)用b-FGF緩釋微球；B組，對照組，雙膝軟骨缺損處植入BMSCs+ACBM；C組：支架組，雙膝軟骨缺損處植入ACBM。分別于術(shù)后4、8、12、16 w猝死動物取材，每組次3只，行大體和組織學(xué)觀察。結(jié)果：原代BMSCs細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)5d左右，即可達到90％以上的融合；電鏡觀察BMSCs細(xì)胞與ACBM黏附良好。A組體內(nèi)植入16w后均形成成熟的軟骨組織，并基本保持了復(fù)合物初始的大小和形狀，新生軟骨外觀及組織學(xué)特征與正常關(guān)節(jié)軟骨基本相