唐氏綜合征血清學(xué)產(chǎn)前篩查與AopE和MTHFRC677T基因多態(tài)性相關(guān)性研究.pdf

1、目的:唐氏綜合征是最常見(jiàn)的染色體遺傳性疾病之一，本病主要的臨床表現(xiàn)為明顯的組織、器官畸形，智力低下，發(fā)育遲緩等，唐氏綜合征患兒的出生給家庭和社會(huì)帶來(lái)極大壓力。通過(guò)唐氏綜合征產(chǎn)前篩查對(duì)唐氏綜合征發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，對(duì)降低唐氏綜合征患兒出生率，提高國(guó)家人口素質(zhì)、維持社會(huì)穩(wěn)定和發(fā)展具有重大意義。聯(lián)合檢測(cè)多項(xiàng)血清指標(biāo)（如:AFP，β-hCG和uE3等）進(jìn)行唐氏綜合征產(chǎn)前篩查對(duì)胎兒無(wú)創(chuàng)傷且操作方便，易于被孕婦接受，適合于在人群中大規(guī)模開(kāi)展。ApoE

2、和MTHFRC677T基因多態(tài)性的檢測(cè)已應(yīng)用于肝臟疾病、阿爾茨海默癥等多種疾病的研究中。有研究表明ApoE和MTHFRC677T基因多態(tài)性可能與唐氏綜合征的發(fā)病存在關(guān)聯(lián)。本研究通過(guò)對(duì)經(jīng)唐氏綜合征產(chǎn)前篩查被判為唐氏綜合征高危和低危孕婦及健康非孕女性的ApoE和MTHFRC677T基因多態(tài)性進(jìn)行研究，以期發(fā)現(xiàn)二者與唐氏綜合征血清學(xué)產(chǎn)前篩查風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，從分子水平的視角對(duì)唐氏綜合征產(chǎn)前篩查進(jìn)行研究，并為優(yōu)生優(yōu)育提供更多、更可靠的理論依據(jù)。

3、r>　　 方法:選取在本院進(jìn)行孕中期唐氏綜合征血清學(xué)產(chǎn)前篩查的孕婦作為妊娠期研究對(duì)象。依據(jù)唐氏綜合征產(chǎn)前篩查的結(jié)果選取唐氏綜合征初篩高危孕婦87名設(shè)為高危組，選取唐氏綜合征產(chǎn)前篩查低危孕婦100名設(shè)為低危組，隨機(jī)選取在本院進(jìn)行健康體檢合格的適齡非孕女性100名設(shè)為對(duì)照組。抽取全部受試對(duì)象空腹肘靜脈血5ml，分離白細(xì)胞，采用NaI法提取基因組DNA;聚合酶鏈反應(yīng)-限制性?xún)?nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)法檢測(cè)MTHFRC677T基

4、因多態(tài)性，多重特異性擴(kuò)增突變系統(tǒng)(multi-MARS)快速分型法檢測(cè)ApoE基因多態(tài)性，兩種基因的基因分型的檢測(cè)結(jié)果均用雙脫氧鏈終止法(sanger法)測(cè)序加以佐證。離心分離血清，用美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特Access2免疫分析系統(tǒng)及其配套的AFP、β-hCG和uE3檢測(cè)試劑和質(zhì)控品，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)全部受試對(duì)象血清AFP、β-hCG和uE3含量。收集全部受試妊娠期婦女年齡、體重、胎齡等一般臨床資料。計(jì)數(shù)MTHFRC677T和ApoE不同基因型

5、和等位基因的頻數(shù)，wilcoxon秩和檢驗(yàn)比較不同組別血清AFP，β-hCG和uE3含量及一般臨床資料差異，經(jīng)logistic回歸分析對(duì)不同因素對(duì)唐氏綜合征高危的影響進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。
　　 結(jié)果:1、高危組血清標(biāo)志物含量（AFP:21.0±7.6μg/L;β-hCG:62.7±9.9μg/L;uE3:0.8±0.2ng/ml）及低危組血清標(biāo)志物含量(AFP:29.8±8.4μg/L;β-hCG:8.8±3.7μg/L;uE3:1.

6、6±0.5ng/ml)均高于對(duì)照組血清標(biāo)志物含量(AFP:5.4±1.3μg/L;β-hCG:1.2±0.4μg/L;uE3:0.06±0.04ng/ml;P＜0.01)。將高危組和低危組血清學(xué)標(biāo)志物AFP，β-hCG和uE3及臨床資料（年齡、體重、胎齡）進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)高危組血清AFP和uE3的濃度明顯低于低危組血清AFP和uE3的濃度(P＜0.01)，而β-hCG濃度和年齡（高危組年齡:30±5歲）則明顯高于低危組（低危組年齡:26±

7、3歲，P＜0.01），體重和胎齡在兩組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。2、將高危組和低危組的血清學(xué)標(biāo)志物、年齡進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，結(jié)果顯示年齡≥30，β-hCG升高，AFP降低，uE3降低是唐氏綜合征產(chǎn)前篩查高危的危險(xiǎn)因素;OR值依次為:21.168、179.660、5.337和7.053。3、本實(shí)驗(yàn)檢出野生型（CC型基因頻率為高危組:0.36，低危組:0.38，對(duì)照組:0.39）、雜合突變型（CT型基因頻率為高危組:0.

8、36，低危組:0.36，對(duì)照組:0.35）、純合突變型（TT型基因頻率為高危組:0.28，低危組:0.26，對(duì)照組:0.26）三種MTHFRC677T基因型;C（等位基因頻率為高危組:0.53，低危組:0.56，對(duì)照組:0.57）和T（等位基因頻率為高危組:0.47，低危組:0.44，對(duì)照組:0.43）兩種等位基因;不同MTHFRC677T基因型分布符合Hardy-weinberg平衡法則(P＞0.05)。4、本實(shí)驗(yàn)檢出3/3型（基因頻

9、率為高危組:0.75，低危組:0.76，對(duì)照組:0.75）、4/3型（基因頻率為高危組:0.15，低危組:0.13，對(duì)照組:0.14）、2/4型（基因頻率為高危組:0.00，低危組:0.01，對(duì)照組:0.01）、2/3型（基因頻率為高危組:0.10，低危組:0.10，對(duì)照組:0.10）四種ApoE基因型;ε2（等位基因頻率為高危組:0.052，低危組:0.055，對(duì)照組:0.055），ε3（等位基因頻率為高危組:0.870，低危組:0.

10、875，對(duì)照組:0.870），ε4（等位基因頻率為高危組:0.078，低危組:0.070，對(duì)照組:0.075）三種等位基因;不同AopE基因型分布符合Hardy-weinberg平衡法則(P＞0.05)。5、采用logistic回歸分析不同ApoE及MTHFRC677T等位基因，血清AFP，β-HCG，uE3含量以及年齡對(duì)唐氏綜合征產(chǎn)前篩查高危風(fēng)險(xiǎn)的交互作用。結(jié)果顯示:同時(shí)攜帶ApoEε3，MTHFRC677TT等位基因并且β-hCG升