胡桃楸活性成分分離解析及抗腫瘤作用的研究.pdf

1、胡桃楸(Juglans mandshurica)為胡桃科、胡桃屬植物，俗名核桃楸。《開寶本草》最早記載胡桃楸有清熱解毒、斂肺定喘、抑菌鎮(zhèn)咳及抗癌之功效?，F(xiàn)代研究表明胡桃楸具有較強的抗腫瘤、抗氧化、鎮(zhèn)痛、抗炎和抗菌等作用。目前，對于抗腫瘤的研究主要集中于胡桃楸的青果皮，樹皮及根部，對其枝葉研究較少，尤其未見胡桃楸葉中單體化合物及其抗腫瘤研究的詳細(xì)報道。 為了闡明胡桃楸葉的抗腫瘤活性成分，論文研究采用活性跟蹤分離的方法，從中得到一

2、個具有抗腫瘤作用的新化合物，并從細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡角度研究了該化合物的抗腫瘤活性。 首先，用活性跟蹤分離的方法，對胡桃楸中具有抗腫瘤活性的化學(xué)成分進(jìn)行目標(biāo)性分離。全程采用腫瘤細(xì)胞跟蹤篩選，利用有機溶劑萃取、硅膠層析、凝膠層析、減壓柱層析及高效液相色譜技術(shù)對胡桃楸中抗腫瘤活性組分進(jìn)行分離純化，最終得到一個活性單體化合物。 其次，利用紅外、紫外可見光譜以及核磁共振波譜(包括二維核磁波譜)和高分辨質(zhì)譜技術(shù)，對得到的單體化合物進(jìn)

3、行結(jié)構(gòu)解析，鑒定為一種新的醌類化合物，命名為對羥基甲氧基苯并雙胡桃醌(p-Hydroxymethoxybenzobijugloac，HMBBJ)。 最后，研究了新化合物HMBBJ的抗腫瘤活性，并初步探討了HMBBJ發(fā)揮抗腫瘤作用的可能機制。 (1)HMBBJ對腫瘤細(xì)胞的抗增殖作用。MTT結(jié)果顯示，HMBBJ可以明顯抑制人宮頸癌細(xì)胞(HeLa)，人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)和人胃癌細(xì)胞(BGC823)增殖，對三種細(xì)胞的IC5

4、0值均小于17uM，且對正常建系細(xì)胞--小鼠前脂肪細(xì)胞(3T3-L1)損傷較小。HMBBJ對四種細(xì)胞的IC50值與陽性對照藥羥基喜樹堿的較為接近，這表明HMBBJ具有較好的抗腫瘤活性且毒副作用較?。喝N腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的測定結(jié)果表明HMBBJ可通過增加細(xì)胞膜的通透性使腫瘤細(xì)胞活力喪失，從而抑制其生長。 (2)HMBBJ對腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用。通過形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，HMBBJ不僅使三種腫瘤細(xì)胞的數(shù)量明顯減少，細(xì)胞

5、變圓，細(xì)胞折光度下降，并伴有染色質(zhì)固縮，細(xì)胞核呈致密濃染，出現(xiàn)凋亡小體的典型凋亡特征。同時，流式細(xì)胞儀的分析也表明了HMBBJ可以有效誘導(dǎo)三種腫瘤細(xì)胞凋亡，并可使其細(xì)胞周期阻滯于G2/M期。線粒體跨膜電位、細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及凋亡相關(guān)的酶(easpase-8,-3)和蛋白(Bcl-2和Bax)的檢測結(jié)果表明，HMBBJ誘導(dǎo)的三種腫瘤細(xì)胞凋亡與線粒體途徑有關(guān)，對于HeLa細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞，還同時有死亡受體途徑的參與；HMBBJ可以使三種

6、腫瘤細(xì)胞的線粒體跨膜電位明顯減小，easpase-3的活性提高，Bel-2蛋白含量降低；對于HeLa細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞，HMBBJ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡還伴隨著easpase-8活性的提高和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的升高，且HMBBJ可以使HeLa細(xì)胞中的Bax蛋白表達(dá)增加。 (3)HMBBJ發(fā)揮抗腫瘤作用的可能機制。在無細(xì)胞體系中，28.9-54.7uM的HMBBJ可以有效抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的活性，這說明DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I可能是HMB