烏飯樹(shù)葉中黃酮等有效成分分析及抗腫瘤作用研究.pdf

1、烏飯樹(shù)(Vaccinium bracteatum Thunb.)為杜鵑花科(Edoaoeae)越桔屬(Vaccinium)植物，又名南燭、烏飯子、染菽等，是一種藥用植物。國(guó)外將烏飯樹(shù)葉有效成分應(yīng)用于食品添加劑與眼疾治療物；我國(guó)中醫(yī)認(rèn)為，烏飯樹(shù)嫩葉取汁制成的烏飯藥食兼具有輕身明目，黑發(fā)駐顏，延年益壽的功效。本研究主要著眼于烏飯樹(shù)葉黃酮等有效成分分析及抗腫瘤作用的研究，對(duì)比不同干燥方法對(duì)烏飯樹(shù)葉有效成分、主要營(yíng)養(yǎng)成分及外觀品質(zhì)的影響，利用響

2、應(yīng)面分析法優(yōu)化烏飯樹(shù)葉黃酮的提取條件，探討超臨界03CO2萃取烏飯樹(shù)葉黃酮的參數(shù)條件，利用動(dòng)物試驗(yàn)闡明烏飯樹(shù)葉乙醇提取物的急性毒性及其抗腫瘤作用，結(jié)合高速逆流色譜(HSCCC)與HPLC技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)抗腫瘤活性成分--槲皮素的分離。主要結(jié)果如下： 1.采用熱風(fēng)烘干、自然晾干、真空低壓干燥、真空冷凍干燥4種方法處理烏飯樹(shù)葉新鮮原料，對(duì)比不同處理方法對(duì)烏飯樹(shù)葉有效成分(黃酮、黃酮苷、多酚、單寧)、主要營(yíng)養(yǎng)成分(可溶性蛋白質(zhì)、可溶性糖、粗

3、脂肪)及外觀品質(zhì)的影響，分析了烏飯樹(shù)葉不同生長(zhǎng)期的有效成分及主要營(yíng)養(yǎng)成分的變化趨勢(shì)，以及黃酮類(lèi)物質(zhì)的生長(zhǎng)部位分布規(guī)律與地區(qū)性差異。結(jié)果表明，真空冷凍干燥對(duì)烏飯樹(shù)葉有效成分、主要營(yíng)養(yǎng)成分及外觀品質(zhì)的影響最??；從生長(zhǎng)時(shí)期來(lái)看，秋季采收的烏飯樹(shù)葉除多酚含量下降2％外，其他成分(可溶性蛋白質(zhì)、可溶性糖、粗脂肪、黃酮、黃酮苷、單寧)的含量都較春夏兩季的要高。不同產(chǎn)地、不同采摘時(shí)間的烏飯樹(shù)葉的黃酮苷含量差異明顯(p<0.05)，烏飯樹(shù)葉的枝條含有少

4、量的黃酮苷，試驗(yàn)中原料含水率在0.1～0.5％，采摘時(shí)間以6～9月為宜，原料產(chǎn)地選擇福州鼓嶺。 2.從經(jīng)濟(jì)安全的角度出發(fā)，選擇乙醇為提取溶劑，采用單因素試驗(yàn)、部分析因試驗(yàn)以及中心組合試驗(yàn)、響應(yīng)面分析法對(duì)有機(jī)溶劑浸漬提取烏飯樹(shù)葉黃酮進(jìn)行了深入研究，分析烏飯樹(shù)葉乙醇提取物的主要成分及乙醇提取物活性成分的熱穩(wěn)定性。試驗(yàn)結(jié)果表明：乙醇濃度和提取溫度是影響烏飯樹(shù)葉黃酮提取量的關(guān)鍵因子，烏飯樹(shù)葉黃酮的最佳工藝條件為：提取前浸泡60 min，

5、液料比50∶1，乙醇濃度86.7％，提取溫度61℃，提取時(shí)間2h，在此條件下一次提取率可達(dá)68.12％。烏飯樹(shù)葉乙醇提取物的主要成分中黃酮類(lèi)物質(zhì)所占比重較大(20.76％)。此外，提取物中還含有8.82％的單寧。所采用的提取溫度(61℃)對(duì)乙醇提取物中黃酮類(lèi)成分--槲皮素沒(méi)有影響，較高提取溫度(70℃)對(duì)槲皮素有破壞作用。 3.采用單因素及正交試驗(yàn)尋找超臨界CO2萃取烏飯樹(shù)葉黃酮的最佳條件，首次探討了夾帶劑、夾帶劑濃度及用量對(duì)烏

6、飯樹(shù)葉黃酮提取量的影響，并對(duì)比超臨界萃取法與有機(jī)溶劑浸漬法的黃酮提取率及提取物的成分。試驗(yàn)結(jié)果表明，最佳的超臨界CO2提取條件為:萃取壓力16MPa，萃取時(shí)間1.5h，萃取溫度50℃，夾帶劑乙醇濃度75％，CO2流量20 kg/h，夾帶劑添加量5mL/g。將夾帶劑添加到烏飯樹(shù)葉的超臨界CO2萃取中，在一定程度上提高了黃酮的提取量，但并沒(méi)有將大部分的黃酮都提取出來(lái)。HPLC分析表明超臨界萃取法較有機(jī)溶劑浸提法可以提取更多的化學(xué)成分，但黃酮

7、提取率與有機(jī)溶劑浸提法相比還差11％左右。 4.以烏飯樹(shù)葉乙醇提取物(主要含黃酮類(lèi)化合物)進(jìn)行小鼠急性毒性試驗(yàn)。研究結(jié)果表明，采用DAS ver1.0 Bliss法計(jì)算出的烏飯樹(shù)葉乙醇提取物的LD50為39.1g/kg，其95％可信限為36.8～41.6g/kg，未見(jiàn)急性毒副作用，該提取物臨床應(yīng)用安全。 5.以環(huán)磷酰胺(CTX)為陽(yáng)性對(duì)照組，以生理鹽水為陰性對(duì)照組，觀察各劑量乙醇提取物對(duì)實(shí)體瘤(U14)和腹水癌(S180

8、)的抑制作用。結(jié)果表明，高劑量的乙醇提取物能顯著抑制小鼠宮頸癌細(xì)胞株(U14)的生長(zhǎng)(p<0.05)，抑制率達(dá)28.76％，而中、低劑量的乙醇提取物對(duì)小鼠宮頸癌細(xì)胞株(U14)′沒(méi)有抑制作用。高、中和低劑量的乙醇提取物均不能抑制小鼠腹水癌(S180)的生長(zhǎng)。 6.采用近年來(lái)備受關(guān)注的高速逆流色譜分離技術(shù)實(shí)現(xiàn)烏飯樹(shù)葉乙醇提取物有效成分的分離純化，并結(jié)合高效液相色譜技術(shù)鑒定分離物--槲皮素及其純度。結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)薄層色譜初篩后得到氯