ADAMTS9基因甲基化檢測對預測肝細胞癌發(fā)生及判斷預后的價值.pdf

1、；g ；l l ；醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾本學位論文在導師( 或指導小組) 的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲的研究成果，其知識產權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內容相關的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數據、申報的專利等知識產權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應的法律責任。人 白研究生簽名：彳函、 導師簽莎吁二級學院領導簽章： _

2、 _ 、．二V 紗年歹 月多／日| ．、；’河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內容外，文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名：i 厶 導師簽章二一、I ’Ⅺ| 3 年) 瑪3 7 B中文摘要A D A M T S 9 基因甲基化檢測對預測肝細胞癌發(fā)生及判斷預后的價值摘 要目的：肝細胞癌是

3、較為常見的惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率近年來有上升的趨勢，但是肝細胞癌發(fā)病的分子機制尚未完全明確。隨著表觀遺傳學研究的深入，抑癌基因啟動子區(qū)域的異常甲基化在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中的作用越來越受到人們的重視。A D A M T S ( a d i s i n t e g r i n a n d m e t a l l o - p r o t e i n a s ew i t ht h r o m b o s p o n d i nm o t i f

4、 s ) 稱為帶有血小板凝血酶敏感蛋白樣模體的解聯(lián)蛋白金屬蛋白酶家族，其基因家族的功能包括細胞外基質的溶解、止血過程，以及對血管生成的調節(jié)等。A D A M T S 9 是其家族成員之一，定位于染色體3 p 1 4 ．3 - p 2 1 ．1 ，是新發(fā)現的一個抑癌基因，既往研究表明在食管癌、鼻咽癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌中均發(fā)現A D A M T S 9 高甲基化。但是，A D A M T S 9 與肝細胞癌發(fā)生、發(fā)展的作用尚未見報道。本

5、研究以肝癌細胞、新鮮肝組織及石蠟包埋組織為標本，檢測A D A M T S 9 基因甲基化水平及基因蛋白表達，結合患者臨床資料、病理學特征及生存期資料分析該基因在肝細胞癌發(fā)生、進展及預后評價中的意義。為抑癌基因A D A M T S 9 啟動子區(qū)域甲基化檢測在臨床中的應用提供理論支持。方法：1 細胞培養(yǎng)及處理：肝癌細胞株H e p ．G 2 按常規(guī)培養(yǎng)于R P M I ．1 6 4 0培養(yǎng)液中，肝癌細胞株S M M C ．7 7 2 1

6、 按常規(guī)培養(yǎng)于D M E M 培養(yǎng)液中。兩種細胞用含5 ．氮雜．2 ’脫氧胞苷( 5 ．A z a - C d R ) 終濃度為1 0u m o I ／L 培養(yǎng)液培養(yǎng)2 4 h ，之后更換不含5 - A z a - C d R 的培養(yǎng)液，繼續(xù)孵育7 2 h 。提取加藥前后細胞株的D N A ，進行甲基化特異性P C R ( M e t h y l a t i o nS p e c i f i cP C R , M S P ) 檢測。2

7、研究對象及標本： 2 0 0 9 年4 月~ 2 0 1 1 年1 月于河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院肝膽外科行手術切除的肝細胞癌患者1 3 2 例，其中男性1 1 3 例，女性1 9 例，年齡2 3 “ 一7 8 歲，平均年齡5 4 ．2 9 - 士9 ．7 8 歲。腫瘤直徑0 ．5 - 2 5 c m 。肝功能C h i l dA 級1 2 3 例，B + C 級9 例。1 3 2 例患者中I 期4 0 例，I I 期7 6例，ⅡI 期1 5