聯(lián)合血清SOX1和VIM基因甲基化對(duì)肝細(xì)胞癌診斷價(jià)值的研究.pdf

1、背景:
　　肝細(xì)胞癌(HCC)是全世界發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，其死亡率在惡性腫瘤中高居第三位。肝癌起病隱匿，60-70％的患者由于得不到及時(shí)的診斷在初次發(fā)現(xiàn)時(shí)便已發(fā)展至肝癌晚期，失去了手術(shù)切除等根治性治療的機(jī)會(huì)。因此，肝癌的早期診斷十分重要。目前，對(duì)于肝癌的診斷和預(yù)后判斷的主要依據(jù)是臨床病理和影像學(xué)檢查。臨床病理學(xué)檢查雖然是診斷肝癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但是其需要手術(shù)切除的標(biāo)本或者肝穿刺標(biāo)本，有創(chuàng)性大大限制了它的臨床應(yīng)用，故一般不作為首選檢

2、查方法。各種影像學(xué)技術(shù)包括超聲，計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)和磁共振成像(MRI)等也被廣泛用于臨床檢查。然而，這些影像學(xué)技術(shù)都存在某些方面的局限性。此外，甲胎蛋白(AFP)等多種血清蛋白作為肝癌的輔助性診斷指標(biāo)在臨床上被廣泛應(yīng)用。但其存在假陽(yáng)性和假陰性的不足，且靈敏度僅為22-60％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床需求。因此，尋找肝癌特異性標(biāo)記物用于肝癌早期診斷迫在眉睫。各種生物標(biāo)記物被廣泛用于診斷和評(píng)估癌癥預(yù)后。循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)是指腫瘤細(xì)胞

3、釋放到外周血中的基因組小片段，它可以作為腫瘤生物標(biāo)記物，為診斷腫瘤提供一種簡(jiǎn)單、無(wú)創(chuàng)的方法。表觀遺傳學(xué)在人類腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起重要作用。在腫瘤中基因啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化所導(dǎo)致的抑癌基因沉默是最常見(jiàn)的表觀遺傳學(xué)改變。許多研究已經(jīng)證實(shí)DNA異常甲基化可作為生物標(biāo)記物用于HCC等癌癥的早期診斷。
　　目的:
　　本研究旨在探究肝細(xì)胞癌病人血清SRY(sex determining region Y)-box1(SOX1)和波

4、形蛋白(VIM)基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)，以及血清SOX1和VIM基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)HCC的診斷價(jià)值。
　　方法:
　　本研究包括360名受試者，其中240名HCC患者，29名肝硬化(LC)患者，66名慢性乙型肝炎(CHB)患者和25名健康對(duì)照(HC)。HCC的診斷標(biāo)準(zhǔn)為美國(guó)肝病研究學(xué)會(huì)(AASLD)2010年發(fā)布的《肝細(xì)胞癌臨床指南》，CHB和LC的診斷標(biāo)準(zhǔn)為AASLD2009年發(fā)布的《慢性乙型肝炎實(shí)踐指南》。所有血液樣本均為

5、清晨采取的空腹靜脈血。經(jīng)血清分離，通過(guò)試劑盒法提取血清中DNA，具體操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。經(jīng)重亞硫酸鹽進(jìn)行甲基化修飾處理，應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MSP)檢測(cè)HCC，LC，CHB患者和健康對(duì)照者血清中SOX1和VIM基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)。
　　結(jié)果:
　　1.HCC組血清SOX1基因啟動(dòng)子甲基化率(72.08％)顯著高于LC組(17.24％,p＜0.001),CHB組(15.15％,p＜0.001)和HC組(4.

6、00％,p＜0.001)。HCC組血清VIM基因啟動(dòng)子甲基化率(61.67％)明顯高于LC組(24.14％，p＜0.001)，CHB組(13.64％，p＜0.001)和HC組(12.00％p＜0.001)。然而，LC組和CHB組，CHB組和HC組或LC組和HC組之間的SOX1和VIM基因啟動(dòng)子甲基化率沒(méi)有顯著差異。
　　2.HCC患者血清SOX1基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)與腫瘤數(shù)量(x2=6.107，p=0.013)，腫瘤大?。▁2=7

7、.986，p=0.018）和TNM分期（x2=12.458，p=0.001）相關(guān)。HCC患者血清VIM基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)與門靜脈癌栓形成(x2=7.528，p=0.006)，腫瘤數(shù)目(x2=9.997，p=0.002)，腫瘤大?。▁2=19.451，p=0.001），TNM分期（x2=8.291，p=0.004）和血管轉(zhuǎn)移（x2=8.832，p=0.003）相關(guān)。單變量邏輯回歸分析提示HCC患者血清SOX1基因啟動(dòng)子甲基化與多個(gè)腫瘤結(jié)

8、節(jié)(OR=0.208，p＜0.001)和TNM分期(Ⅲ-Ⅳ)(OR=4.987，p＜0.001)相關(guān);VIM基因啟動(dòng)子甲基化與門靜脈癌栓(OR=0.006，p＜0.001)，TNM分期(Ⅲ-Ⅳ)(OR=3.978，p＜0.001)，腫瘤大小(＞5cm)(OR=2.340，p=0.037)和血管轉(zhuǎn)移(OR=33.681，p＜0.001)相關(guān)。
　　3.當(dāng)用于診斷HCC與LC和CHB患者時(shí)，SOX1基因啟動(dòng)子甲基化的靈敏度為72.08

9、％，VIM基因啟動(dòng)子甲基化的靈敏度為61.67％，均高于AFP(56.67％，x2=12.436，p＜0.001; x2=1.242，p=0.265)。聯(lián)合SOX1和VIM基因啟動(dòng)子甲基化用于診斷HCC的靈敏度為82.50％，特異度為78.95％。當(dāng)AFP大于20ng/ml或SOX1和VIM中至少一個(gè)基因發(fā)生甲基化時(shí)，其診斷HCC的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為88.33％、72.63％、89.08％和71.13％。當(dāng)AF

10、P大于20ng/ml且SOX1和VIM基因均發(fā)生甲基化時(shí)，其診斷HCC的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為48.33％、97.89％、98.31％和42.86％。
　　結(jié)論:
　　1.本研究首次發(fā)現(xiàn)HCC患者血清中存在SOX1和VIM基因啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化且甲基化率高于LC和CHB患者。
　　2.SOX1和VIM基因啟動(dòng)子甲基化與HCC患者臨床病理指標(biāo)間具有相關(guān)性，提示SOX1和VIM啟動(dòng)子甲基化與HCC的